2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:
  研究BHL DNA適配體能否在體外有效干擾銅綠假單胞菌群體感應(yīng)系統(tǒng),抑制其生物被膜形成,并干擾浮游菌綠膿菌素的生物合成。
  方法:
  1.體外培養(yǎng)銅綠假單胞菌,觀察高濃度BHL DNA適配體是否影響銅綠假單胞菌生長曲線。
  2.體外干擾銅綠假單胞菌生物被膜的形成:體外構(gòu)建銅綠假單胞菌生物被膜模型,給予高濃度BHL DNA適配體進(jìn)行成膜干擾;光學(xué)顯微鏡觀察生物被膜形態(tài)學(xué)變化;結(jié)晶紫染色法定量測定生

2、物被膜。
  3.體外干擾銅綠假單胞菌綠膿菌素的產(chǎn)生:設(shè)計(jì)適配體組、陰性對照組和文庫對照組,培養(yǎng)48小時(shí)后采用氯仿萃取法定量測定銅綠假單胞菌綠膿菌素含量。
  4.細(xì)胞外DNA(extracellular DNA eDNA)對BHL DNA適配體抑制銅綠假單胞菌生物被膜形成的影響:氯化鋰裂解法抽提銅綠假單胞菌基因組DNA(Genomic DNA gDNA),設(shè)計(jì)適配體組、陰性對照組、gDNA組和適配體+gDNA組,培養(yǎng)48小

3、時(shí)后結(jié)晶紫染色法定量測定生物被膜。
  結(jié)果:
  1.培養(yǎng)基中含有高濃度BHL DNA適配體時(shí),銅綠假單胞菌的生長曲線與不含適配體的高度一致,并未出現(xiàn)適配體抑制或促進(jìn)細(xì)菌增殖情況。
  2.體外干擾銅綠假單胞菌生物被膜的形成:光學(xué)顯微鏡觀察陰性對照和文庫對照均顯示大片致密的膜狀結(jié)構(gòu)。而適配體干擾組Aptamer1、2、16、46則顯示出了單個(gè)菌體分布或是疏松網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。Aptamer16干擾下的生物被膜生長幾乎被破壞,

4、鏡下存在大量散在的單個(gè)菌體。結(jié)晶紫染色定量測定生物被膜量,陰性對照組與文庫對照組的測定值高于適配體組(P<0.05),而陰性對照組與文庫對照組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
  3.體外干擾銅綠假單胞菌綠膿菌素的生物合成:適配體組綠膿菌素值低于陰性對照組和文庫對照組(P<0.05),而陰性對照組與文庫對照組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
  4.細(xì)胞外DNA(extracellular DNA eDNA)對BHL DNA適配體抑制銅綠假單胞

5、菌生物被膜形成的影響:陰性對照組生物被膜定量測定高于適配體組(P<0.05),但低于gDNA組和gDNA+適配體組(P<0.05);適配體組定量測定值低于gDNA組和gDNA+適配體組(P<0.05);gDNA組高于gDNA+適配體組(P<0.05)。
  結(jié)論:
  1.BHL DNA適配體不影響細(xì)菌增殖,不影響最終體系細(xì)菌密度。
  2.BHL DNA適配體在體外可有效干擾銅綠假單胞菌生物被膜的形成;
  3

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