壯肝逐瘀煎對肝纖維化大鼠肝星狀細(xì)胞PI3K-Akt信號傳導(dǎo)途徑的影響.pdf

1、目的:本課題將研究壯肝逐瘀煎對肝纖維化大鼠肝星狀細(xì)胞PI3K/Akt信號傳導(dǎo)途徑的影響,以進(jìn)一步闡釋壯肝逐瘀煎抗肝纖維化的作用機(jī)理。
　　方法:健康清潔級SD大鼠102只,雌雄各半,體重220~250克,隨機(jī)取14只作為正常對照組(A組)。剩余大鼠進(jìn)行肝纖維化造模,于第4W末A組及造模大鼠各隨機(jī)處死4只,做病理檢測證實肝纖維化形成。其余造模大鼠隨機(jī)分為病理模型組(B組)、壯肝逐瘀煎大劑量(成人40倍量)、中劑量(成人20倍量)、小

2、劑量(成人10倍量)治療組(C、D、E組)、大黃蟅蟲丸對照組(F組)、秋水仙堿對照組(G組)共六個組,每組14只。采用CCL4復(fù)合因素大鼠肝纖維化模型造模方法。造模4周后各組分別予以灌胃給藥(C、D、E、F、G組)、生理鹽水(A、B組),灌胃液體量為1ml/100g體重,1次/天,藥物濃度及等效劑量按體表面積折算。A、B、C、D、E、F、G各組于用藥治療后6W末,禁食12小時,每組取10只大鼠,經(jīng)10％水合氯醛麻醉,股靜脈采血后處死,剖

3、取肝臟,取肝臟右葉相同部位組織2塊,一塊置入10％甲醛,作常規(guī)石醋切片,另一塊于液氮中保存以備提取 mRNA。肉眼觀察肝組織大體形態(tài)變化;采用免疫組織化學(xué)染色圖像分析方法,檢測大鼠肝組織 PI3K、Akt蛋白水平的改變;采用 real-time PCR方法,檢測肝組織 PI3K、Akt、PDK1基因的表達(dá)情況;體外貼壁培養(yǎng)HSC-T6細(xì)胞,流式細(xì)胞術(shù)檢測HSC-T6細(xì)胞的凋亡率。
　　結(jié)果:(1)大鼠一般情況觀察顯示:壯肝逐瘀煎可

4、明顯改善HF大鼠的精神狀態(tài)、飲食、皮毛色澤,增加其體重。(2)肝組織大體形態(tài)變化:壯肝逐瘀煎高、中劑量組及秋水仙堿組肝臟大體形態(tài)較模型對照組改善較為明顯。(3)免疫組化染色:壯肝逐瘀煎對肝纖維化大鼠肝組織 PI3K、Akt蛋白表達(dá)的影響:與病理模型組相比,壯肝逐瘀煎治療組、大黃蟄蟲丸組及秋水仙堿組肝組織PI3K及Akt蛋白陽性面積比明顯降低(P<0.01或P<0.05);與大黃蟅蟲丸組相比,壯肝逐瘀煎大、中劑量組明顯優(yōu)于大黃蟅蟲丸組(P

5、<0.05),壯肝逐瘀煎小劑量組與大黃蟅蟲丸組相比無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);與秋水仙堿組相比,壯肝逐瘀煎大劑量組明顯優(yōu)于秋水仙堿組(P<0.05),壯肝逐瘀煎中、小劑量組與秋水仙堿組相比無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。(4)實時熒光PCR檢測:①壯肝逐瘀煎對HF大鼠PI3K基因表達(dá)的影響:與病理模型組比較,壯肝逐瘀煎大、中治療組及大黃蟅蟲丸組PI3KmRNA的表達(dá)均顯著降低(P<0.01或P<0.05);與大黃蟅蟲丸組比較,壯肝逐瘀煎

6、大劑量組明顯優(yōu)于大黃蟅蟲丸組( P<0.05),壯肝逐瘀煎中、小劑量組與大黃蟅蟲丸組相比無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);與秋水仙堿組比較,壯肝逐瘀煎大、中劑量組明顯優(yōu)于秋水仙堿組(P<0.05),壯肝逐瘀煎小劑量組與秋水仙堿組相比無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。②壯肝逐瘀煎對HF大鼠Akt基因表達(dá)的影響:與病理模型組比較,壯肝逐瘀煎治療組及秋水仙堿組 AktmRNA的表達(dá)均顯著降低(P<0.01或 P<0.05);與大黃蟅蟲丸組比較,壯肝逐

7、瘀煎大、中劑量組明顯優(yōu)于大黃蟅蟲丸組( P<0.05),壯肝逐瘀煎小劑量組與大黃蟅蟲丸組相比無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);與秋水仙堿組比較,壯肝逐瘀煎大、中劑量組明顯優(yōu)于秋水仙堿組(P<0.05),壯肝逐瘀煎小劑量組與秋水仙堿組相比無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。③壯肝逐瘀煎對HF大鼠PDK1基因表達(dá)的影響:與病理模型組比較,壯肝逐瘀煎治療組PDK1mRNA的表達(dá)均顯著降低(P<0.01或P<0.05);與大黃蟅蟲丸組比較,壯肝逐瘀煎大、

8、中劑量組明顯優(yōu)于大黃蟅蟲丸組(P<0.05),壯肝逐瘀煎小劑量組與大黃蟅蟲丸組相比無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);與秋水仙堿組比較,壯肝逐瘀煎大、中劑量組明顯優(yōu)于秋水仙堿組(P<0.05),壯肝逐瘀煎小劑量組與秋水仙堿組相比無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。(5)流式細(xì)胞術(shù)檢測:與正常組相比,壯肝逐瘀煎治療組、大黃蟅蟲丸組及秋水仙堿組對HSC細(xì)胞的凋亡率均明顯提升(P<0.01);與大黃蟅蟲丸組比較,壯肝逐瘀煎小、中、大劑量組明顯優(yōu)于大黃蟅蟲