Ang2-siRNA慢病毒載體干預(yù)裸鼠移植性惡性黑色素瘤的研究.pdf

1、目的：構(gòu)建人惡性黑色素瘤裸鼠移植瘤模型，利用Ang2-siRNA慢病毒載體介導(dǎo)的RNA干擾作用，沉默Ang2基因在裸鼠移植瘤中的表達(dá)，研究在體內(nèi)Ang2-siRNA慢病毒對移植瘤中Ang2基因的影響，并檢測移植瘤微血管密度，腫瘤的增殖情況和體積，評價及初步明確Ang2表達(dá)水平、微血管密度與腫瘤增殖之間的關(guān)系，為腫瘤的基因治療提供一定的基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)研究依據(jù)。
　　方法：1、將15雄性裸鼠隨機(jī)分成空白組（PBS control group

2、）、空載組（Vector control group）、實(shí)驗(yàn)組（RNAi group）3組，每組5只。
　　2、正常培養(yǎng)、傳代A375細(xì)胞，制成單細(xì)胞懸液，調(diào)整細(xì)胞密度至約為5×107個/ml。
　　3、在裸鼠右腋皮下，用100μl微量進(jìn)樣器接種制備好的A375單細(xì)胞懸液，100μl/只，建立人惡性黑色素瘤裸鼠移植瘤模型。
　　4、空白組、空載組、實(shí)驗(yàn)組3組裸鼠皮下移植瘤分別多點(diǎn)注射PBS、pNL-EGFP-Vecto

3、r和pNL-EGFP-Ang2-siRNA慢病毒液，200μl/只，并于腹腔內(nèi)加強(qiáng)注射同種溶液500μl/只，進(jìn)行干擾試驗(yàn)研究。
　　5、觀察并記錄裸鼠移植瘤增殖情況和體積，統(tǒng)計、分析各組之間體積差異，并繪制腫瘤生長曲線。
　　6、用實(shí)時熒光定量RT-PCR法檢測移植瘤中Ang2基因的相對表達(dá)量，統(tǒng)計分析各組之間Ang2基因表達(dá)水平的差異和腫瘤增殖程度的關(guān)系。
　　7、用免疫組織化學(xué)法檢測移植瘤的微血管密度，統(tǒng)計分析各

4、組之間差異及其與腫瘤增殖程度的關(guān)系。
　　結(jié)果：1、成功建立了人惡性黑色素瘤裸鼠移植瘤模型。
　　2、實(shí)驗(yàn)組移植瘤體積顯著小于空白組和空載組，有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），空白組和空載組移植瘤體積之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。
　　3、實(shí)驗(yàn)組移植瘤Ang2基因相對表達(dá)水平顯著低于空白組和空載組，有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），空白組和空載組Ang2基因相對表達(dá)水平之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。