分月扇舟蛾4種神經(jīng)肽的分子特征、表達(dá)及作用機(jī)制探討.pdf

1、本文克隆了分月扇舟蛾的抑咽側(cè)體神經(jīng)肽(Cloan-AS)、促咽側(cè)體神經(jīng)肽(Cloan-AT)、滯育激素(Cloan-DH)和性信息素合成激活肽(Cloan-PBAN)的cDNA序列和DNA序列，利用RT-PCR技術(shù)檢測它們的組織特異性表達(dá)及不同發(fā)育階段的相對定量表達(dá)情況，對促咽側(cè)體神經(jīng)肽進(jìn)行了原核表達(dá)的初步研究，并探討了AS了的作用機(jī)制，主要結(jié)果如下： Cloan-AS的全長cDNA序列為580bp，編碼區(qū)372bp，編碼124

2、個aa。5’非翻譯區(qū)從1到111，3’非翻譯區(qū)從484到580。信號肽切割位點位于第26個aa和第27個aa之間(IHA-AP)。與Spofr-AS、Samcy-AS、Pseun-AS和Drome-AS的相似性分別為83％、77％、83％和42％。 Cloan-AT的全長cDNA序列為790bp，編碼區(qū)399bp，編碼133個aa。5’非翻譯區(qū)從1到83，3’非翻譯區(qū)從483到790。信號肽切割位點位于第22aa和23aa之間(

3、AVA-AP)。與Spofr-AT、Helar-AT、Pseun-AT、Mytse-AT、Manse-AT、Samcy-AT和Bommo-AT的相似性分別達(dá)到92.5％、91.9％、90.4％、89.7％、85.8％、84.4％和80.6％。 Cloan-DH-PBAN的全長cDNA序列為796bp，編碼區(qū)588bp，編碼196個aa。5’非翻譯區(qū)從1到22，3’非翻譯區(qū)從611到796。信號肽切割位點位于第20aa和21aa之

4、間(VEA-TN)。Cloan-DH-PBAN的全長cDNA編碼DH、PBAN和其它3個SGNP。Cloan-DH與Spoex-DH、Spoli-DH、Agrip-DH、Helar-DH、Samcy-DH、ManseDH、Helze-DH、Helas-DH、Antpe-DH、Helvi-DH、Bomma-DH、Bommo-DH和Adosp-DH的相似性分別為86.2％、81.2％、93.1％、79.3％、79.3％、79.3％、75.9

5、％、75.9％、79.3％、75.9％、75.9％、75.9％和37.9％。Cloan-PBAN與Spoex-PBAN、Spoli-PBAN、Agrip-PBAN、Helar-PBAN、Samcy-PBAN、Manse-PBAN、Helze-PBAN、Helas-PBAN、Antpe-PBAN、Helvi-PBAN、Bommo-PBAN、Mambr-PBAN、Adosp-PBAN和Lymdi-PBAN的相似性分別為90.9％、90.9％

6、、87.9％、93.9％、87.9％、85.7％、93.9％、93.9％、87.9％、91.2％、90.9％、90.9％、63.9％和87.9％。 編碼Cloan-AT的DNA序列有814bp，包括2個外顯子和1個內(nèi)含子。編碼Cloan-DH-PBAN的DNA序列有3694bp，包括6個外顯子和5個內(nèi)含子。 利用RT-PCR對Cloan-AS、Cloan-AT和Cloan-DH-PBANmRNA的組織特異性表達(dá)進(jìn)行了研究

7、，結(jié)果表明這三個基因均在頭和腸中表達(dá)，在體壁中沒有檢測到。使用半定量RT-PCR分析表明，這三個基因在頭中的相對表達(dá)水平均是幼蟲期和蛹期較低，成蟲期較高。 利用pQE30載體構(gòu)建了一個Cloan-AT與His融合的大腸桿菌表達(dá)載體pQEAT，但在轉(zhuǎn)化JM109后用IPTG未誘導(dǎo)出表達(dá)產(chǎn)物。 在以往研究的基礎(chǔ)上，探討了AS的作用機(jī)制。大多數(shù)抑咽側(cè)體神經(jīng)肽(AS)抑制CA對JH的合成。在JH的合成途徑中，AS的抑制作用發(fā)生在

8、JH生物合成的第一步，cAMP可能是其第二信使。但有些A型的AS對源昆蟲的CA沒有作用，這可能是在這些昆蟲中存在另一個抑制JH合成的機(jī)制，包括完全不同類型的AS及第二信使等。一種昆蟲中多個A型的AS成員基本上來自一個單一的多肽前體，這些成員可能作用于不同亞類的受體。A型的AS可能通過抑制對卵黃蛋白原的合成或吸收來抑制直翅類昆蟲卵巢的發(fā)育，這個作用也可能與抑制CA對JH的合成有關(guān)。AS能抑制前腸、中腸、后腸肌肉的收縮，導(dǎo)致昆蟲厭食、生長延