Ad5CMVeNOS轉(zhuǎn)導(dǎo)靜脈橋?qū)θi動(dòng)脈旁路移植術(shù)后血管狹窄影響——體外研究及機(jī)制探索.pdf

1、全文共由四部分組成.第一部分：重組內(nèi)皮一氧化氮合酶腺病毒擴(kuò)增純化及病毒滴度滴定;目的：在心血管疾病中,常有內(nèi)皮一氧化氮合酶（eNOS）和NO的產(chǎn)生發(fā)生改變.因此在心血管疾病基因治療中,eNOS基因成為一個(gè)具有吸引力的目的基因.同時(shí)由于腺病毒載體是高效的載體系統(tǒng),故采用腺病毒介導(dǎo)的重組內(nèi)皮一氧化氮合酶（Ad5CMVeNOS）進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究.結(jié)論：成功地進(jìn)行了兩種重組腺病毒擴(kuò)增及純化,達(dá)到了高病毒滴度的重組腺病毒,為進(jìn)一步開展血管疾病基因

2、治療的體外體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究,作好了充分的準(zhǔn)備工作.第二部分：Ad5CMVeNOS在成纖維細(xì)胞水平上轉(zhuǎn)染與表達(dá);目的：由于血管外膜的成纖維細(xì)胞也成為血管狹窄,特別是血管向內(nèi)再構(gòu)的主要原因,外膜成纖維細(xì)胞增生并遷移,更主要是向肌成纖維細(xì)胞的分化,成為新內(nèi)膜形成和血管再構(gòu)的原因之一.故外膜成為目前基因治療的研究熱點(diǎn),為此在成纖維細(xì)胞水平上進(jìn)行了轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)研究.結(jié)論：Ad5CMVeNOS體外能有效轉(zhuǎn)染小鼠成纖維細(xì)胞PA317,并獲得蛋白表達(dá).這種作用

3、為重組內(nèi)皮一氧化氮合酶通過(guò)血管局部轉(zhuǎn)染,以血管外膜作為治療途徑之一提供了理論依據(jù).第三部分：重組腺病毒對(duì)不同表達(dá)細(xì)胞和血管環(huán)轉(zhuǎn)染的體外研究;目的：比較重組腺病毒對(duì)不同細(xì)胞、特別對(duì)血管細(xì)胞的轉(zhuǎn)染和對(duì)人冠狀動(dòng)脈旁路移植動(dòng)脈靜脈血管的轉(zhuǎn)導(dǎo),為攜帶目的基因的重組腺病毒治療血管狹窄提供更好的轉(zhuǎn)染途徑.結(jié)論：從細(xì)胞水平上證明了腺病毒載體能將治療性目的基因?qū)敫鞣N血管細(xì)胞,從組織水平上證明了動(dòng)脈和靜脈血管都獲得了蛋白表達(dá).提示不僅血管內(nèi)膜和外膜都能被

4、重組腺病毒有效轉(zhuǎn)染;而且從理論上間接說(shuō)明臨床無(wú)論動(dòng)脈或靜脈的血管狹窄都可用腺病毒作為載體運(yùn)行基因治療和預(yù)防.第四部分：Ad5CMVeNOS對(duì)犬頸動(dòng)脈旁路移植術(shù)后靜脈橋狹窄影響及機(jī)制探索;目的：為冠狀動(dòng)脈旁路移植術(shù)后大隱靜脈近期和遠(yuǎn)期血管再狹窄提供一種有效的基因治療手段,避免目前使用的血管內(nèi)加壓灌注造成的內(nèi)皮損傷和血流沖洗等缺點(diǎn),更好地進(jìn)行臨床干預(yù)和治療.我們觀察了Ad5CMVeNOS通過(guò)局部轉(zhuǎn)移方法對(duì)犬頸動(dòng)脈旁路移植術(shù)后靜脈橋血管狹窄的