草魚白細(xì)胞介素-4 基因(CiIL-4)的分子鑒定和功能分析.pdf

1、白細(xì)胞介素-4（Interleukin-4，IL-4）是一種擁有多種生物活性的因子，在免疫系統(tǒng)中，IL-4作為 Th2免疫反應(yīng)過程中的關(guān)鍵性的細(xì)胞因子發(fā)揮著重要的作用。然而，在硬骨魚類中關(guān)于 IL-4功能的研究一直很少報(bào)道。在這項(xiàng)研究中，我們克隆到了草魚（Ctenopharyngodon idellus）IL-4/13B的基因序列，并命名為 CiIL-4/13B。克隆到的CiIL-4/13B基因序列全長包含464個(gè)核苷酸殘基（nucle

2、otides，nt），其中包括一個(gè)開放閱讀框（open reading frame，ORF），這個(gè)開放閱讀框由408個(gè)氨基酸殘基組成，翻譯后的多肽分子量大小為15.5 kDa。多重序列比對結(jié)果顯示CiIL-4/13B與鯉魚（Cyprinus carpio）IL-4/13B的相似性最高，為49％。在所有待檢測的組織和外周血淋巴細(xì)胞中都能檢測到CiIL-4/13B mRNA的表達(dá)，其中外周血淋巴細(xì)胞和腮中的mRNA含量最高。在嗜水氣單胞菌（

3、Aeromonas hydrophila）感染后的草魚中所有組織和外周血淋巴細(xì)胞中 CiIL-4/13B mRNA表達(dá)量均顯著上升。利用原核表達(dá)和蛋白純化等手段成功制備了草魚的去掉信號肽的成熟的IL-4/13B蛋白，并利用得到的重組蛋白制備了多克隆抗體。蛋白免疫印跡結(jié)果分析顯示，草魚血清中的天然 IL-4/13B蛋白存在糖基化，并且在蛋白水平上證明嗜水氣單胞菌感染的草魚血清中 IL-4/13B蛋白的表達(dá)量在實(shí)驗(yàn)期間是越來越高的。體外實(shí)驗(yàn)

4、中，重組草魚 IL-4/13B蛋白（rCiIL-4/13B）能夠顯著抑制炎性細(xì)胞因子的釋放、單核/巨噬細(xì)胞（MO/MФ）吞噬的能力。此外，動(dòng)物保護(hù)試驗(yàn)的結(jié)果顯示，適量的rCiIL-4/13B蛋白可以顯著提高嗜水氣單胞菌感染后的草魚存活率。同時(shí)，組織載菌量實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，rCiIL-4/13B蛋白可以減少草魚的肝、脾、腎和血組織中細(xì)菌的數(shù)量，進(jìn)而改善整個(gè)受細(xì)菌感染的微環(huán)境。本實(shí)驗(yàn)第一次揭示了魚類MO/MФ和 IL-4/13B之間的調(diào)控關(guān)系。