棉大卷葉螟絲素重鏈基因的克隆、功能驗(yàn)證及在生產(chǎn)上的應(yīng)用.pdf

1、棉大卷葉螟(Sylepta derogata Fabricius)是鱗翅目螟蛾科昆蟲，分布范圍廣、寄主種類多，能對(duì)多種經(jīng)濟(jì)作物產(chǎn)生較大危害。為了進(jìn)一步研究棉大卷葉螟的吐絲危害機(jī)理，本文以棉大卷葉螟的絲素重鏈基因?yàn)檠芯繉?duì)象，克隆得到其cDNA全長(zhǎng)序列，測(cè)定了不同發(fā)育階段棉大卷葉螟吐絲基因的表達(dá)量，以及取食不同寄主后棉大卷葉螟吐絲基因的表達(dá)量。在此基礎(chǔ)上，運(yùn)用飼喂法干擾棉大卷葉螟絲素重基因的表達(dá)，進(jìn)而影響卷葉螟的吐絲卷葉，并觀察干擾表達(dá)后對(duì)

2、棉大卷葉螟種群發(fā)育與蛹重的影響。結(jié)果如下:
　　1.根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)的其他昆蟲的絲素重鏈基因，通過(guò)RACE法克隆得到棉大卷葉螟絲素重鏈基因cDNA全長(zhǎng)。棉大卷葉螟絲素重鏈基因cDNA全長(zhǎng)為1465bp，起始密碼子為ATG，終止密碼子為TAG，開放閱讀框全長(zhǎng)為1323bp。依據(jù)棉大卷葉螟絲素重鏈基因的核苷酸序列推導(dǎo)其氨基酸序列，估算該蛋白分子量為43.553kDa，等電點(diǎn)pI為6.26。將所獲得的基因全長(zhǎng)同其他已經(jīng)登錄到GenBank的

3、昆蟲絲素重鏈基因序列進(jìn)行比對(duì)，發(fā)現(xiàn)與棉大卷葉螟絲素重鏈基因序列一致性最高的是外米綴蛾(Corcyra cephalonica)，達(dá)到65％，其次為大蠟螟(Galleria mellonella)與琥珀蠶(Antheraea assama)，一致性皆為59％。
　　2.通過(guò)實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)，分析了不同發(fā)育階段棉大卷葉螟絲素重鏈基因的表達(dá)量，以及取食不同寄主后棉大卷葉螟絲素重鏈基因的表達(dá)量。結(jié)果表明，絲素重鏈基因表達(dá)量隨蟲態(tài)、蟲齡的

4、不同而不同:2齡、4齡幼蟲以及預(yù)蛹期絲素重鏈基因表達(dá)量相對(duì)較高，其中2齡蟲絲素重鏈基因表達(dá)量最高;3齡、5齡幼蟲絲素重鏈基因表達(dá)量相對(duì)較低，蛹期及羽化后絲素重鏈基因的表達(dá)量更低，甚至近于零;取食不同寄主后棉大卷葉螟絲素重鏈基因的表達(dá)量不同，飼喂苘麻葉片的棉大卷葉螟絲素重鏈基因的相對(duì)表達(dá)量最高，棉花次之，木槿最低，且它們之間差異顯著。
　　3.通過(guò)飼喂法干擾棉大卷葉螟幼蟲絲素重鏈基因的表達(dá)，并從菌液濃度、飼喂時(shí)間、飼喂的幼蟲蟲齡等方

5、面研究其對(duì)棉大卷葉螟絲素重鏈基因表達(dá)量的影響。菌液濃度試驗(yàn)結(jié)果表明，隨著飼喂棉大卷葉螟幼蟲菌液濃度的增加，絲素重鏈基因相對(duì)表達(dá)量下降。喂食不同蟲齡棉大卷葉螟幼蟲不同天數(shù)菌液的試驗(yàn)結(jié)果表明，2L、3L、4L幼蟲喂食表達(dá)dsRNA的菌液后其重鏈基因表達(dá)量均下降，且喂食表達(dá)dsRNA的菌液3天、5天后的絲素重鏈基因表達(dá)量比喂食1天的表達(dá)量顯著下降。同時(shí)，2L、4L干擾效果比3L的好。試驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明，菌液濃度、飼喂時(shí)間、飼喂的幼蟲蟲齡均會(huì)對(duì)卷葉螟