楊樹(shù)NPR1基因的克隆及功能驗(yàn)證.pdf

1、楊樹(shù)作為林業(yè)生產(chǎn)巾的模式植物，因其生長(zhǎng)速度快、適應(yīng)性強(qiáng)和豐產(chǎn)等特性在世界各地廣泛種植。然而，楊樹(shù)病害多樣，傳統(tǒng)的抗病措施存在局限性，抗病機(jī)制的研究及分子育種具有很大的發(fā)展前景。系統(tǒng)獲得性抗性(systemic acquiredresistance，SAR)是一種植物主動(dòng)防御機(jī)制，由局部感染引起的天然免疫反應(yīng)，可保護(hù)植物體免受細(xì)菌、真菌及病毒的侵染，具有廣譜抗病性。NPR1基因是植物SAR信號(hào)途徑中重要的調(diào)節(jié)因子，在水楊酸或病原體激發(fā)下可

2、誘導(dǎo)PR基因。過(guò)量表達(dá)NPR1類(lèi)基因可有效增加植物自身的抗性。
　　 本文利用生物信息學(xué)的方法，根據(jù)楊樹(shù)基因組數(shù)據(jù)分析了NPR1基因的特點(diǎn)，在此基礎(chǔ)上克隆和確定了南林95楊中的NPR1同源基因，構(gòu)建其系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)，利用多重序列比對(duì)分析錨蛋白重復(fù)和BTB/POZ構(gòu)域的分布，同時(shí)開(kāi)展了PtNPR1.1亞細(xì)胞定位研究。構(gòu)建pBI121+PtNPR1.2過(guò)量表達(dá)載體，對(duì)楊樹(shù)進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化，并對(duì)轉(zhuǎn)化植株進(jìn)行了抗生素篩選和PCR鑒定。獲得了如下

3、主要結(jié)果：
　　 (1)克隆得到楊樹(shù)兩個(gè)NPR1的同源基因PtNPR1.1(JQ231218)和PtNPR1.2(JF732893)。
　　 (2)PtNPR1.1和PtNPR1.2相應(yīng)的蛋白序列和進(jìn)化關(guān)系分析表明其與擬南芥NPR1基因結(jié)構(gòu)及功能上高度的同源性。
　　 (3)構(gòu)建了PtNPR1.1-GFP融合表達(dá)載體，轉(zhuǎn)化擬南芥原生質(zhì)體表明PtNPR1.1的亞細(xì)胞定位在細(xì)胞質(zhì)中。
　　 (4)PtNPR1