電針治療慢性胰腺炎疼痛的神經(jīng)分子機(jī)制研究.pdf

1、[目的]
　　 疼痛是慢性胰腺炎最主要的臨床表現(xiàn)之一，也是慢性胰腺炎在治療上較大的難題。但由于慢性胰腺炎疼痛的機(jī)制十分復(fù)雜，目前的認(rèn)識也不夠深入，所以慢性胰腺炎疼痛的治療仍未達(dá)到理想的效果。本研究的目的就是探討內(nèi)源性硫化氫(H2S)在三硝基苯磺酸溶液（Trinitro-Benzene-Sulfonic Acid，TNBS）誘導(dǎo)的慢性胰腺炎疼痛大鼠模型中的作用機(jī)制及電針的鎮(zhèn)痛作用。
　　 [方法]
　　 行為學(xué)實驗

2、
　　 于成年雄性SD大鼠胰管內(nèi)注入TNBS溶液或溶劑建立慢性胰腺炎模型及對照組。在行為學(xué)測試過程中，所有大鼠造模前及造模后從第1到5周每周都以vonFreyfilament(VFF)刺激大鼠中上腹部，觀察其對機(jī)械性刺激的陽性反應(yīng)率及時間變化過程。在造模后的第4周分別給予H2S合成酶拮抗劑（DL-Propargylglycine，PPG）或電針(ST36)治療后進(jìn)行行為學(xué)測試，觀察處理效果。
　　 病理學(xué)觀察
　　

3、 造模后的第4周及模型鼠經(jīng)電針治療后，將大鼠胰腺組織取出，放入10％的福爾馬林溶液中固定，石蠟包埋后切成厚度為4μm的薄片，然后進(jìn)行HE染色，用于觀察大鼠胰腺組織病理形態(tài)學(xué)變化。
　　 分子生物學(xué)實驗
　　 用Westernblot的方法觀察比較在造模后第4周慢性胰腺炎模型組與對照組大鼠胰腺組織內(nèi)H2S合成酶胱硫醚γ裂解酶(Cystathionine-γ-lyase，CSE)及胰腺相關(guān)脊髓背根神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元(Dorsal

4、RootGanglion，DRG)T9-13內(nèi)胱硫醚β合成酶（Cystathionine-β-synthase，CBS）和瞬時受體電位香草素亞型1(TransientReceptorPotentialVanilloid1，TRPV1)蛋白相對表達(dá)量的變化；慢性胰腺炎模型大鼠電針治療前、后胰腺相關(guān)DRGs(T9-13)內(nèi)H2S合成酶CBS和TRPV1蛋白相對表達(dá)量的變化。
　　 [結(jié)果]
　　 行為學(xué)實驗
　　 (

5、1)大鼠慢性胰腺炎疼痛模型的建立胰管內(nèi)注射TNBS溶液誘導(dǎo)的慢性胰腺炎疼痛模型大鼠從造模后第1周到第5周的腹部機(jī)械性痛敏感反應(yīng)頻率出現(xiàn)了明顯增高，與溶劑對照組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)；
　　 (2)H2S合成酶拮抗劑(PPG)處理實驗在造模后第4周給予PPG(100mg/kg·體重)腹腔注射一次1小時后，能使慢性胰腺炎大鼠腹部機(jī)械性痛敏反應(yīng)頻率降低，與生理鹽水組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；
　　

6、 (3)電針治療實驗在造模后第4周起給予連續(xù)電針（ST36，0.5小時/次）治療7天后能使大鼠腹部機(jī)械性痛敏反應(yīng)頻率降低，且該效應(yīng)能持續(xù)3天，與假電針組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。
　　 病理學(xué)檢查
　　 (1)胰管內(nèi)注射TNBS溶液后第5周，大鼠胰腺組織出現(xiàn)慢性炎癥細(xì)胞浸潤、大量腺體細(xì)胞丟失、節(jié)段性的腺體萎縮及纖維化；對照組的胰腺沒有觀察到明顯的形態(tài)學(xué)改變；
　　 (2)在造模后第4周起給予連續(xù)電針

7、治療7天后，大鼠胰腺組織慢性炎癥細(xì)胞浸潤，腺體萎縮及纖維化改變均較假電針組減輕。
　　 分子學(xué)實驗
　　 (1)在造模后第4周，慢性胰腺炎模型大鼠與溶劑對照組比較胰腺組織內(nèi)CSE及胰腺相關(guān)DRGs(T9-13)內(nèi)CBS、TRPV1蛋白相對表達(dá)量增高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；
　　 (2)在造模后第4周起給予連續(xù)電針治療7天的慢性胰腺炎組大鼠與假電針組比較胰腺相關(guān)DRGs（T9-13）內(nèi)CBS和TRPV1