DBTC誘發(fā)大鼠慢性胰腺炎動物模型的建立及其胰腺炎纖維化發(fā)生機制研究.pdf

1、第一部分 DBTC誘發(fā)慢性胰腺炎動物模型的建立 目的：應(yīng)用DBTC誘導(dǎo)建立SD大鼠CP模型，并加以兩種作用點不同的藥物干預(yù)，研究CP發(fā)生發(fā)展過程中病理學(xué)變化、纖維化程度、血請AMS變化及浸潤炎性細胞的作用。 方法：實驗組大鼠一次性尾靜脈注入0.8 mg/kg DBTC的80％乙醇溶液，2天后再隨機分為A組30只，不用任何藥物；B組26只，按6mg/kg.d行每天一次腹腔內(nèi)注射己酮可可堿注射液（PTX）；C組37只，每周腹

2、腔內(nèi)注射曲古霉素A（TSA）1ml（1μ g/ml）；對照組尾靜脈注入等量80％乙醇溶液。實驗組鼠分別于第14天、28天和56天處死，對照組鼠于第56天處死。處死鼠均行大體肉眼觀察及胰腺、肝、肺、腎鏡下病理學(xué)觀察及胰腺病理學(xué)評分；血清AMS含量由全自動生化分析儀測定，膠原纖維染色為VG染色法，肥大細胞為甲苯胺藍染色法；巨噬細胞、CD4+和CD8+染色均為EnVision免疫組化法。 結(jié)果： （1）大體觀察：A、B和C三組

3、胰腺在14天、28天和56天處死鼠均出現(xiàn)不同程度的水腫、包膜張力增加、局部胰腺壞死出血及與周圍組織有粘連，28天和56天鼠部分胰腺出現(xiàn)局限性硬結(jié)節(jié)形成，以上表現(xiàn)B組和C組比A組輕。對照組胰腺均正常。實驗組胰腺外部分肝、肺出現(xiàn)出血、壞死及膿腫形成。 （2）鏡下觀察及評分：對照組胰腺組織學(xué)結(jié)構(gòu)正常。實驗組中56天處死鼠病理學(xué)評分、纖維化評分及CP發(fā)生率均明顯高于14天處死鼠（P<0.05或P<0.01）。實驗組之間CP發(fā)生率無明顯差

4、異，但A組28天和56天處死鼠中至重度CP發(fā)生率明顯高于B和C組（P<0.05）。實驗組胰腺外肝、肺鏡下表現(xiàn)相似于肉眼表現(xiàn)。 （3）血清AMS：各實驗組血清AMS含量均明顯高于對照組（P<0.01），但各組之間無明顯差異（P>0.05）。 （4）炎性細胞計數(shù)：各實驗組56天處死鼠巨噬細胞和肥大細胞計數(shù)明顯高于14天處死鼠（P<0.05）和對照組（P<0.01）；B和C組56天處死鼠CD4+計數(shù)明顯低于14天處死鼠（P<0

5、.01），但CD8+計數(shù)則相反（P<0.01）；實驗組之間CD4+/CD8+比值無明顯差異，但均明顯低于對照組（P<0.05或P<0.01）。 （5）相關(guān)性分析：實驗組病理學(xué)評分、纖維化評分、巨噬細胞計數(shù)和肥大細胞計數(shù)之間均呈密切正相關(guān)（P<0.01）；A組和C組病理學(xué)評分與CD4+計數(shù)均呈密切負相關(guān)（P<0.05或P<0.01）；A組纖維化評分與CD8+計數(shù)呈密切負相關(guān)（P<0.01）。 結(jié)論： （1）DBTC

6、一次性尾靜脈注射能成功地建立SD大鼠CP模型，該模型具有操作簡單、建模時間短、CP發(fā)病率高及費用低等優(yōu)點。但DBTC對肝、肺等主要臟器有一定非致死性毒副作用。（2）該模型較符合人類CP病理形態(tài)學(xué)特征及其血清AMS含量改變。（3）胰腺組織內(nèi)浸潤的巨噬細胞、肥大細胞及CD8+細胞在該模型CP發(fā)生發(fā)展過程中起了重要作用。 第二部分大鼠慢性胰腺炎纖維化發(fā)生機制研究 目的：探討大鼠CP發(fā)生發(fā)展與炎性細胞、PSC及細胞生長因子的關(guān)系

7、以及PTX、TSA干預(yù)大鼠CP的作用。 方法：實驗組和對照組大鼠胰腺組織經(jīng)4％甲醛固定后制作石蠟包埋切片。α-SMA和desmin染色為EnVision二步法，PDGF-BmRNA、TGF-β1mRNA、CTGFmRNA染色為原位雜交法。 結(jié)果： （1）炎性細胞計數(shù)見第一部分；（2）各實驗組不同時間點活化-PSC（a-PSC）計數(shù)均明顯高于對照組（P<0.01）；A組28天和56天處死鼠a-PSC計數(shù)明顯高于14

8、天處死鼠（P<0.05），B和C組56天處死鼠a-PSC計數(shù)明顯高于14天處死鼠（P<0.05）。（3）實驗組各時間點靜止-PSC（s-PSC）計數(shù)均明顯低于對照組（P<0.05），但三組各時間點之間均無明顯差異（P>0.05）。（4）B、C兩組28天和56天處死鼠CTGFmRNA和PDGF-BmRNA表達陽性率及其評分均明顯高于對照組（P<0.01）：A組56天處死鼠TGF-β1mRNA表達陽性率及其評分均明顯高于對照組（P

9、或P<0.01）；A組和B組56天處死鼠TGF-β1mRNA表達陽性率明顯高于14天處死鼠（P<0.05）；A組28天和56天處死鼠CTGFmRNA和PDGF-BmRNA表達陽性率及其評分均明顯高于14天處死鼠（P<0.05或P<0.01）。（5）實驗組a-PSC、s-PSC計數(shù)及PDGF-BmRNA、TGF-β1mRNA、CTGFmRNA表達陽性率和評分之間均無明顯差異（P>0.05）。（6）輕、中和重度CP a-PSC計數(shù)及TGF-

10、β1mRNA、CTGFmRNA、PDGF-BmRNA表達評分和計數(shù)均高于正常組（P<0.01）；中度和重度CP a-PSC計數(shù)及CTGFmRNA、PDGF-BmRNA表達評分和計數(shù)均明顯高于輕度CP（P<0.05或P<0.01）；輕度和中度CP s-PSC計數(shù)明顯低于正常組織（P<0.01）。（7）實驗組中a-PSC計數(shù)及TGF-β1mRNA、CTGFmRNA、PDGF-BmRNA表達評分均與病理評分、纖維化評分呈密切正相關(guān)（P<0.0

11、5或P<0.01）；實驗組中a-PSC計數(shù)與TGF-β1mRNA、CTGFmRNA、PDGF-BmRNA表達評分均呈密切正相關(guān)（P<0.01）。 結(jié)論： （1）a-PSC參與了CP的纖維化過程，PDGF-BmRNA、TGF-β1mRNA、CTGFmRNA三種細胞因子能活化PSC及與胰腺纖維化關(guān)系密切。（2）肥大細胞和巨噬細胞與活化PSC有較密切關(guān)系。（3）CP發(fā)病機制復(fù)雜，單獨作用于某個環(huán)節(jié)的藥物難以對其發(fā)病進行控制，如