腎上腺素能系統(tǒng)參與慢性胰腺炎疼痛的分子機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　1.探究P2X3受體在三硝基苯磺酸（TNBS）誘導(dǎo)的慢性胰腺炎疼痛中的作用；
　　2.探討去甲腎上腺素（NE）及其受體在調(diào)節(jié)胰腺特異性神經(jīng)元中P2X3受體表達(dá)和功能中的作用特征。
　　方法：
　　1.對(duì)180-200g雄性 SD大鼠的胰管注射 TNBS從而建立大鼠的慢性胰腺炎（Chronic Pancreatitis，CP）模型。運(yùn)用VFF方法評(píng)測(cè)CP大鼠的痛行為反應(yīng)。
　　2.胰腺壁注射熒光素

2、（DiI）標(biāo)記胰腺特異性背根節(jié)（DRG）神經(jīng)元，運(yùn)用全細(xì)胞膜片鉗方法研究CP大鼠中胰腺相關(guān)DRG神經(jīng)元ATP電流及ATP誘發(fā)的動(dòng)作電位的變化特性。
　　3.運(yùn)用Western Blotting方法檢測(cè)CP模型大鼠胰腺相關(guān)DRG神經(jīng)元中P2X3受體蛋白表達(dá)情況。
　　4.運(yùn)用ELISA的方法檢測(cè)血液中去甲腎上腺素（NE）的水平，運(yùn)用免疫組化的方法檢測(cè)胰腺相關(guān)神經(jīng)元P2X3，NEβ2受體的表達(dá)情況。
　　5.運(yùn)用鈣成像的方

3、法檢測(cè)去甲腎上腺素（NE）對(duì)ATP誘發(fā)的鈣信號(hào)的調(diào)節(jié)作用。
　　結(jié)果
　　1.P2X受體拮抗劑Suramin，P2X2，P2X3受體拮抗劑A317491明顯翻轉(zhuǎn)了CP大鼠的胰腺痛覺過(guò)敏。
　　2.與對(duì)照組相比，CP增加了胰腺相關(guān)DRG（T9-T13）中P2X3受體的蛋白表達(dá)量，而P2X2，P2X1受體的蛋白表達(dá)量并沒有發(fā)生變化。
　　3.給 CP大鼠腹腔連續(xù)7天注射去甲腎上腺素β受體的非選擇性拮抗劑（Propra

4、nolol，PROP）翻轉(zhuǎn)了胰腺相關(guān)DRG（T9-T13）中P2X3受體蛋白的高表達(dá)，而連續(xù)7天注射去甲腎上腺素α受體的非選擇性拮抗劑（Phentolamine，PHEN）并沒有翻轉(zhuǎn)胰腺相關(guān)DRG（T9-T13）中P2X3受體蛋白的高表達(dá)。
　　4.與對(duì)照組相比，CP增加了胰腺相關(guān)DRG（T9-T13）中NEβ2受體的蛋白表達(dá)量，而大鼠血清中NE的水平并沒有發(fā)生變化。
　　5.全細(xì)胞膜片鉗記錄顯示，與正常組相比，CP大鼠胰腺

5、相關(guān) DRG神經(jīng)元ATP電流的電流密度顯著增大，ATP能夠誘發(fā)動(dòng)作電位的細(xì)胞數(shù)量明顯的增多。
　　6.全細(xì)胞膜片鉗記錄顯示，與生理鹽水組相比，注射NEβ受體非選擇性拮抗劑組的大鼠胰腺相關(guān)DRG神經(jīng)元ATP電流的電流密度顯著減小，ATP能夠誘發(fā)的動(dòng)作電位的細(xì)胞數(shù)量明顯的減少。
　　7.在正常大鼠的胰腺相關(guān)的DRG（T9-T13）上，NE能顯著增強(qiáng)ATP誘導(dǎo)的鈣信號(hào)。
　　8.PKA的抑制劑H-89抑制了去甲腎上腺素對(duì)AT

6、P反應(yīng)的增強(qiáng)作用，而PKA的激動(dòng)劑Forskolin則模擬了NE對(duì)ATP誘發(fā)的鈣信號(hào)的增強(qiáng)作用。
　　9.給CP大鼠腹腔注射去甲腎上腺素β受體的非選擇性拮抗劑（Propranolol，PROP）翻轉(zhuǎn)了CP大鼠的痛覺過(guò)敏，而注射去甲腎上腺素α受體的非選擇性拮抗劑（Phentolamine，PHEN）并沒有翻轉(zhuǎn)CP大鼠的痛覺過(guò)敏。
　　結(jié)論：
　　慢性胰腺炎激活了去甲腎上腺素能系統(tǒng)，通過(guò)大鼠初級(jí)感覺神經(jīng)元的β受體，調(diào)節(jié)了胰