7型腺病毒溫州株基因組主要序列分析及感染性克隆構(gòu)建.pdf

1、溫州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文7型腺病毒溫州株基因組主要序列分析及感染性克隆構(gòu)建姓名：姜招嫦申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：遺傳學(xué)指導(dǎo)教師：彭穎呂建新20100501溫州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文6、Ad7感染性克隆pMDl8TsAd7的構(gòu)建及感染性鑒定穿梭載體pMDl8TsAdlAdr經(jīng)Pmel線性化后與Ad7wzlDNA共轉(zhuǎn)化于感受態(tài)EcoliBJ5183中，氨卞霉素抗性平板篩選較小單菌落，挑取菌落培養(yǎng)并抽提質(zhì)粒。限制性內(nèi)切酶鑒定質(zhì)粒構(gòu)建是否正確。將構(gòu)建好

2、的感染性克隆pMDl8TsAd7轉(zhuǎn)染至A549細(xì)胞，觀察是否病變以鑒定是否具有感染性。結(jié)果：l、Ad的分離培養(yǎng)和基因組DNA提取、酶切鑒定病毒基因組DNA的BamHI、H／ndIII和Sinai酶切圖譜，對(duì)照國外文獻(xiàn)，從BamHI的帶型初步確定本次分離的Ad病毒株為Ad7d2型。2、Ad7wzl基因組主要序列T克隆的構(gòu)建各重組質(zhì)粒雙酶切及ITRL、E1A261R、E1855kDa、Hexon、E3、ITRR基因測序結(jié)果表明重組質(zhì)粒pMD

3、l8TsITRL、pMDl8Ts—E1A26lR、pMDl8TsE1855kDa、pMDl8TsHexon、pMDl8Ts—E3和pMDl8TsITRR構(gòu)建成功。3、Ad7wzl基因組主要序列BLAST比對(duì)分析BLAST比對(duì)結(jié)果顯示本文得到的病毒基因組與HAd7有著最高的相似度，表明該病毒株為7型腺病毒。4、Ad7wzl基因組主要序列同源性分析序列分析及Bioedit軟件比對(duì)結(jié)果表明其核苷酸序列和相應(yīng)的氨基酸序列與GenBank已經(jīng)發(fā)表

4、的Ad7全基因組序列(AY495969、AY601634、AY594256、AY594255、BK005235)比較同源性分別達(dá)到930％100O％和980％～100O％。5、穿梭載體pMDl8TsAdlAdr的構(gòu)建。pMDl8TsAdlAdr酶切及Adl和Adr基因測序結(jié)果表明pMDl8TsAdlAdr穿梭載體構(gòu)建成功。6、Ad7感染性克隆pMDTl8sAd7的構(gòu)建及感染性鑒定pMDl8TsAd7酶切、轉(zhuǎn)染A549細(xì)胞產(chǎn)生CPE的結(jié)果