軟骨組織工程的基礎(chǔ)和臨床應用研究.pdf

1、【目的】:從細胞、分子和基因水平研究探討人體不同類型軟骨細胞(彈性軟骨和透明軟骨)的體外生長代謝規(guī)律,特別是軟骨細胞功能老化及相關(guān)基因的改變,并以此為基礎(chǔ)在人體內(nèi)構(gòu)建組織工程軟骨以證實軟骨組織工程技術(shù)在人體內(nèi)的可行性.【方法】:細胞來源于小耳畸形病人殘余耳軟骨和雕刻耳軟骨支架后多余肋軟骨碎片,實驗分3部分,第一部分:通過細胞計數(shù),倒置相差顯微鏡觀察,阿利新蘭法,免疫組化,RT-PCR比較人耳(彈性軟骨)、肋軟骨(透明軟骨)細胞的體外獲得

2、率及原代至第5代的細胞增殖,細胞形態(tài)和細胞外基質(zhì)分泌的不同之處,研究人軟骨細胞體外生長代謝及功能老化規(guī)律.第二部分:在以上研究基礎(chǔ)上,取第一代及第四代人肋軟骨細胞采用DNA微陣矩分析人軟骨細胞體外老化過程中基因表達水平的變化.第三部分:以體外培養(yǎng)功能良好的耳或肋軟骨細胞,按細胞濃度50調(diào)10<'6>/ml和30﹪Pluronic- Fl27/Ham'sF- 12混勻注入人耳后皮下或耳屏部位,記錄注射量.3-6個月后在小耳畸形病人二期手術(shù)

3、時部分取材,進行大體觀察,組織塊透射電子顯微鏡檢查,組織學染色,及Ⅱ膠原免疫組化染色,對再生的軟骨組織進行評價.【結(jié)論】:人肋軟骨細胞體外培養(yǎng)3代,平均擴增18.326倍,耳軟骨細胞培養(yǎng)2代平均擴增9.35倍后,軟骨細胞在表型特征(Ⅱ型膠原表達)及代謝功能上(細胞外基質(zhì)分泌)均能維持較佳狀態(tài),可作為組織工程化軟骨構(gòu)建的種子細胞.在軟骨細胞老化過程中,細胞形態(tài)向類成纖維樣形態(tài)轉(zhuǎn)化,細胞表型發(fā)生去分化,細胞增殖力下降,細胞外基質(zhì)合成減少而基