纖溶微生物的資源發(fā)掘及抗菌肽odorranain-NR的結(jié)構(gòu)與功能研究.pdf

1、南京農(nóng)業(yè)大學(xué)博士學(xué)位論文纖溶微生物的資源發(fā)掘及抗菌肽odranainNR的結(jié)構(gòu)與功能研究姓名：車巧林申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：微生物學(xué)指導(dǎo)教師：賴仞201009纖溶微生物的資源發(fā)掘及抗菌肽odorranainNR的結(jié)構(gòu)與功能研究MK9(H4)，細(xì)胞壁肽聚糖類型是A3T型，診斷氨基酸是LL2，6二氨基庚二酸。細(xì)胞膜極性脂為DPG、PG、四個(gè)未知的磷脂乖一個(gè)未知的脂。主要的脂肪酸為C181oJ9c，C16：0，10methylCls：0，C1

2、8：0。16SrRNA序列同源性分析表明，E121與其屬內(nèi)已發(fā)表的典型菌株序列同源性為955966％，在系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)中形成一個(gè)獨(dú)立的分支通過(guò)以上多相分類學(xué)分析，最終確定菌株E121為氣微菌屬內(nèi)的一個(gè)新種，命名為乙腈氣微菌。乙腈氣微茵以1％接種量接入TSB，30oC、180rpm震蕩培養(yǎng)，15h后纖溶酶活開(kāi)始進(jìn)入快速增長(zhǎng)期，50h時(shí)酶活達(dá)到最大(0132Umld)，而后進(jìn)入衰退期。經(jīng)滅活的扣未滅活的瓊脂糖纖維蛋白平板檢測(cè)，纖溶酶原未滅活的平

3、板上出現(xiàn)透明的溶解圈，滅活的平板上出現(xiàn)模糊的溶解圈，且溶圈大于未滅活平板上的，說(shuō)明乙腈氣微茵纖溶酶只具有直接水解纖維蛋白的活性，而不具有激活纖溶酶原轉(zhuǎn)化為纖溶酶的活性。乙腈氣微茵纖溶酶可以有效地水解纖維蛋白原的a鏈、B鏈和十鏈，酶與纖維蛋白原37oC孵育15rain，a鏈和B鏈就被徹底水解，孵育2h7鏈也開(kāi)始水解，6h后被徹底水解。乙腈氣微茵纖溶酶在濃度為00132Uml“1和0065Umld時(shí)無(wú)溶血活性，有開(kāi)發(fā)為新型澍抗栓藥物的應(yīng)用潛

4、力TSG41革蘭氏染色陰性，茵體呈桿狀(0608x1224lain)，端生單根鞭毛，能運(yùn)動(dòng)，無(wú)芽孢，兼性厭氧，化能異養(yǎng)型。在NB瓊脂培養(yǎng)基上37oC培養(yǎng)48h的茵落形態(tài)為：淺黃白色，圓形，較平坦，邊緣整齊，透明，有光澤，直徑1618衄。能在麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上生長(zhǎng)。菌株生長(zhǎng)的溫度范圍是437oC，最適生長(zhǎng)溫度為30。37oC。茵株生長(zhǎng)的pH范圍是5010O，最適pH范圍為7080TSG41。能生長(zhǎng)于05％(w／v)的NaCl濃度范圍內(nèi)，最

5、適范圍為03％。VP反應(yīng)、MR反應(yīng)陰性；不能產(chǎn)生H2S和吲哚；能使硝酸鹽還原。過(guò)氧化氫酶，脲酶、賴氨酸脫羧酶、DNA水解酶陽(yáng)性；氧化酶、鳥(niǎo)氨酸脫羧酶、精氨酸脫羧酶，苯丙氨酸脫氨酶、精氨酸雙水解酶為陰性。能水解七葉苷、膽汁七葉苷、馬尿酸鹽、吐溫20、40、60、80；不能水解淀粉、酪蛋白、纖維素、羧甲基纖維素。能使明膠液化。能利用D果糖、D甘露糖、麥芽糖、D蜜二糖、D葡萄糖、蔗糖、L脯氨酸、L酪氨酸、谷氨酸、L丙氨酸等作為唯一碳源和能源，

6、并能發(fā)酵麥芽糖、果糖產(chǎn)酸，甘露糖微弱產(chǎn)酸TSG4TDNAGC摩爾百分含量為683％。主要的脂肪酸為isoC1s：o，C16：o和anteisoC15：o。16SrRNA序列同源性分析表明，TSG4。與其屬內(nèi)已發(fā)表的典型菌株序列同源性最高為995％，與嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌LMG9581的DNADNA雜交率(平均值)為602％。通過(guò)以上多相分類學(xué)分析，最終確定菌株TSG41。為寡養(yǎng)單胞茵屬內(nèi)的一個(gè)新種，命名為纖溶寡養(yǎng)單胞菌。纖溶寡養(yǎng)單胞茵以1％