ANXA1、ANXA4、CA1在不同臨床分期結(jié)直腸癌中表達模式的研究.pdf

1、背景和目的:
　　 結(jié)直腸癌是嚴(yán)重危害人類健康的惡性腫瘤,目前缺乏有效、特異的結(jié)直腸癌分子診治療靶標(biāo),從而嚴(yán)重限制了臨床上結(jié)直腸癌綜合治療效果的提高。為了篩選高靈敏度、高特異性的有助于結(jié)直腸癌早期診斷及預(yù)后判斷的特征分子群,明確結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展過程中分子群變化的時空規(guī)律,建立結(jié)直腸癌分子分型的模式,本研究組在前期工作利用高通量芯片技術(shù)及組學(xué)技術(shù)在轉(zhuǎn)錄、轉(zhuǎn)錄后及翻譯水平篩選出了不同臨床分期結(jié)直腸癌差異表達的分子群；比對各層面的差異

2、分子群及各分子在不同臨床分期結(jié)直腸癌中的表達模式,我們發(fā)現(xiàn)ANXA4、CA1及ANXA1在轉(zhuǎn)錄、轉(zhuǎn)錄后及翻譯水平的表達模式基本一致,提示這三個分子在結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展中可能發(fā)揮著重要作用,這一結(jié)果引起我們的關(guān)注。本研究將在蛋白及轉(zhuǎn)錄水平擴大樣本量探究者三個分子在不同臨床分期結(jié)直腸癌組織中的表達情況,并分析其與臨床預(yù)后的相關(guān)性,明確這些分子在結(jié)直腸癌中的功能及表達規(guī)律,為結(jié)直腸癌的早期診斷及預(yù)后判斷提供實驗依據(jù)。
　　 方法:

3、r>　　 收集結(jié)直腸癌標(biāo)本建立臨床資料庫,采用Western blot在蛋白質(zhì)水平分析ANXA1、ANXA4、CA1在不同臨床分期、不同分化程度的結(jié)直腸癌組織中的表達模式。在轉(zhuǎn)錄水平利用熒光實時定量PCR檢測目的基因在相應(yīng)結(jié)直腸癌組織中的表達水平。采用Kaplan-Meier生存曲線結(jié)合LOOCV判別函數(shù)分析各分子與預(yù)后的相關(guān)性。
　　 結(jié)果:
　　 (1)在蛋白水平,ANXA1在四期結(jié)直腸癌組織中均較正常組織中表達上

4、調(diào),上調(diào)率分別為:88.9％,22.22％,55.56％和62.50％。與自身正常對照比較,ANXA1在Ⅰ期表達水平明顯上調(diào)(P=0.037),比較不同分期癌組織間的差異,發(fā)現(xiàn)Ⅰ期上調(diào)水平最明顯,其動態(tài)表達趨勢與前期實驗結(jié)果基本相符。ANXA1在低分化腺癌與高分化腺癌中的表達水平明顯高于正常組織及中分化腺癌中的表達水平,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),但高與低分化癌組織之間表達水平比較不具有統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；與正常結(jié)直腸組

5、織比較,ANXA4在不同分期的結(jié)直腸癌組織中表達上調(diào),上調(diào)率分別為:85.71％,57.14％,71.43％和88.33％,Ⅰ期、Ⅳ期與正常對照比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。但以Ⅳ期上調(diào)明顯。此結(jié)果與前期實驗結(jié)果相吻合。ANXA4在高中低不同分化程度中表達水平依次降低,但僅低分化腺癌與高分化腺癌表達量之間的差異存在統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.047)；在蛋白水平,CA1在各期結(jié)直腸癌組織中表達明顯下調(diào),在Ⅰ期、Ⅱ期中下調(diào)率均為83.3

6、3％,在Ⅲ期、Ⅳ期癌組織中下調(diào)率均達到了100％。其表達水平在Ⅲ、Ⅳ期中下調(diào)的幅度明顯大于Ⅰ期、Ⅱ期,兩者之間存在統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。下調(diào)的趨勢與前期實驗基本相符。CA1在高分化腺癌到低分化腺癌組織中,其表達水平依次降低,低分化腺癌中CA1的表達水平明顯低于高分化腺癌、中分化腺癌中的表達水平,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　 (2)在mRNA水平,與蛋白質(zhì)水平相同,ANXA1在四期結(jié)直腸癌組織中均表現(xiàn)為上調(diào),而

7、ANXA4在Ⅰ期、Ⅲ期、Ⅳ期結(jié)直腸癌組織中表達上調(diào),其中Ⅳ期上調(diào)水平具有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.007),而Ⅱ期中,ANXA4表達水平略微下調(diào),但與其正常對照相比較差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。CA1在四期結(jié)直腸癌組織中表達均下調(diào)(P<0.05)。且ANXA4、CA1的動態(tài)表達模式與蛋白水平的動態(tài)表達模式相符,ANXA1在mRNA水平的動態(tài)表達模式與蛋白質(zhì)水平不完全相符。
　　 (3)生存分析結(jié)果示:經(jīng)Kaplan-Meie

8、r生存曲線分析,CA1與預(yù)后相關(guān),log-rank檢驗P=0.029；而ANXA1、ANXA4與預(yù)后關(guān)系不密切,P值分別為0.532及0.638
　　 結(jié)論:
　　 1、ANXA1在Ⅰ期癌組織中表達明顯升高,提示其可能為癌變發(fā)生時出現(xiàn)表達變化的早期分子；ANXA4在Ⅳ期癌組織中表達明顯上調(diào),提示其可能與腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移能力相關(guān)；CA1與腫瘤的分期及分化程度均有密切關(guān)系。
　　 2、ANXA1、ANXA4、CA1在不