蛋白激酶D1在大鼠急性胰腺炎中作用機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：
　　探討蛋白激酶D1(Protein Kinase D1,PKD1)在實(shí)驗(yàn)性大鼠急性胰腺炎（acute pancreatitis,AP)中的作用及其分子學(xué)機(jī)制。
　　方法：
　　將66只健康級(jí)雄性 Sprague-Dawley（SD）大鼠(體重約250?30g)，隨機(jī)分為三組:急性胰腺炎模型組（A組），急性胰腺炎+CID755673（蛋白激酶D1抑制劑）腹腔注射干預(yù)組（B組），假手術(shù)組（C組）。A組和B組采用微

2、量泵胰膽管逆行緩慢注射3.5％?；悄懰徕c溶液建立大鼠AP模型，C組大鼠僅開腹翻動(dòng)胰腺數(shù)次。A組于關(guān)腹后3h，6h，9h，12h，24h五個(gè)時(shí)間點(diǎn)各處死6只大鼠，B組及C組于關(guān)腹后3h，6h,12h三個(gè)時(shí)間點(diǎn)各處死6只大鼠，采集心臟血標(biāo)本立即送檢血淀粉酶（amylase,AMS)，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法(enzyme linked-immuno-sorbent assay,ELISA)檢測(cè)腫瘤壞死因子-ɑ（tumor necrosis fac

3、tor-alpha，TNF-ɑ）、白介素-6（interleukin-6，IL-6)水平。觀測(cè)胰腺大體病理變化并切取部分胰腺組織用預(yù)冷的PBS溶液將血液洗凈后，采用Western-Blot方法檢測(cè)PKD1、天冬氨酸特異的半胱氨酸蛋白酶-3(cysteinaspartatespecific protease-3,Caspase-3)的水平；另一部分用于 HE染色、脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的缺口末端標(biāo)記法（terminal-deoxyn

4、ucleotidyl transferase mediated nick end labeling，TUNNEL）染色以及核轉(zhuǎn)錄因子-kappa B（Nuclear factor-kappa B,NF-kB)免疫組織化學(xué)染色，然后在光鏡下觀察。
　　結(jié)果：
　　1.各組AMS、TNF-alpha、IL-6及NF-kB結(jié)果：C組各時(shí)間位點(diǎn)的AMS、TNF-alpha、IL-6及NF-kB水平均明顯低于A組和B組相應(yīng)時(shí)間位點(diǎn)的A

5、MS、TNF-alpha、IL-6及NF-KB水平（P<0.05）。B組各時(shí)間位點(diǎn)的AMS、TNF-alpha、IL-6及NF-KB水平明顯低于A組相應(yīng)時(shí)間位點(diǎn)的AMS、TNF-alpha、IL-6及NF-KB水平（P<0.05）。
　　2.各組胰腺組織中蛋白激酶 D1的表達(dá)情況：C組（12h位點(diǎn)）中蛋白激酶D1的表達(dá)明顯低于A組（12h位點(diǎn)）和B組（12h位點(diǎn)），B組(12h位點(diǎn)）的蛋白激酶D1表達(dá)明顯低于A組（12h位點(diǎn)），有

6、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。A組中蛋白激酶D1表達(dá)在0-12h時(shí)間段內(nèi)呈時(shí)間依賴性，即從3h位點(diǎn)逐漸上升，12h表達(dá)最高，而24h位點(diǎn)依然高表達(dá)，但低于12h位點(diǎn)的表達(dá)。
　　3.各組胰腺組織中Caspase3的表達(dá)情況：A組（12h位點(diǎn)）中的表達(dá)顯著低于B組（12h位點(diǎn)），但A組（12h位點(diǎn)）、B組（12h位點(diǎn)）中的表達(dá)顯著高于C組（12h位點(diǎn)），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　4.各組大鼠胰腺組織病理學(xué)評(píng)分結(jié)果：

7、C組各時(shí)間位點(diǎn)病理學(xué)評(píng)分明顯低于A組和B組各時(shí)間位點(diǎn)（P<0.01），B組各時(shí)間位點(diǎn)病理學(xué)評(píng)分低于A組各時(shí)間位點(diǎn)（P<0.01），且A組中3h位點(diǎn)病理評(píng)分低于6h位點(diǎn)，6h位點(diǎn)病理評(píng)分低于12h位點(diǎn)（P<0.05)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　5.各組胰腺組織HE染色病理結(jié)果：C組各時(shí)間位點(diǎn)胰腺腺泡結(jié)構(gòu)完整，間質(zhì)稍有水腫，無顯著病理學(xué)改變。A組各時(shí)間位點(diǎn)胰腺組織充血水腫明顯，腺泡結(jié)構(gòu)紊亂，可見胰腺組織壞死崩解，間隙模糊不清，有中性粒細(xì)胞及

8、紅細(xì)胞浸潤(rùn)，隨時(shí)間位點(diǎn)的延長(zhǎng)，有加重趨勢(shì)。B組各相應(yīng)時(shí)間位點(diǎn)病理變化同A組相似，但充血水腫、壞死崩解程度及病理?yè)p傷程度較A組減輕。
　　6.各組胰腺組織凋亡水平結(jié)果：與C組相比較，A組、B組各時(shí)間位點(diǎn)的凋亡指數(shù)較高（P＜0.05）；與A組相比較，B組各時(shí)間位點(diǎn)的凋亡指數(shù)顯著升高（P＜0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.蛋白激酶D1在大鼠急性胰腺炎中高表達(dá)，且在3h-12h區(qū)段呈時(shí)間依賴性；CID755673可有效地減少蛋