蛋白激酶D1在大鼠急性胰腺炎中作用機制的實驗研究.pdf

1、目的：
　　探討蛋白激酶D1(Protein Kinase D1,PKD1)在實驗性大鼠急性胰腺炎（acute pancreatitis,AP)中的作用及其分子學機制。
　　方法：
　　將66只健康級雄性 Sprague-Dawley（SD）大鼠(體重約250?30g)，隨機分為三組:急性胰腺炎模型組（A組），急性胰腺炎+CID755673（蛋白激酶D1抑制劑）腹腔注射干預組（B組），假手術組（C組）。A組和B組采用微

2、量泵胰膽管逆行緩慢注射3.5％牛磺膽酸鈉溶液建立大鼠AP模型，C組大鼠僅開腹翻動胰腺數次。A組于關腹后3h，6h，9h，12h，24h五個時間點各處死6只大鼠，B組及C組于關腹后3h，6h,12h三個時間點各處死6只大鼠，采集心臟血標本立即送檢血淀粉酶（amylase,AMS)，酶聯免疫吸附試驗法(enzyme linked-immuno-sorbent assay,ELISA)檢測腫瘤壞死因子-ɑ（tumor necrosis fac

3、tor-alpha，TNF-ɑ）、白介素-6（interleukin-6，IL-6)水平。觀測胰腺大體病理變化并切取部分胰腺組織用預冷的PBS溶液將血液洗凈后，采用Western-Blot方法檢測PKD1、天冬氨酸特異的半胱氨酸蛋白酶-3(cysteinaspartatespecific protease-3,Caspase-3)的水平；另一部分用于 HE染色、脫氧核糖核苷酸末端轉移酶介導的缺口末端標記法（terminal-deoxyn

4、ucleotidyl transferase mediated nick end labeling，TUNNEL）染色以及核轉錄因子-kappa B（Nuclear factor-kappa B,NF-kB)免疫組織化學染色，然后在光鏡下觀察。
　　結果：
　　1.各組AMS、TNF-alpha、IL-6及NF-kB結果：C組各時間位點的AMS、TNF-alpha、IL-6及NF-kB水平均明顯低于A組和B組相應時間位點的A

5、MS、TNF-alpha、IL-6及NF-KB水平（P<0.05）。B組各時間位點的AMS、TNF-alpha、IL-6及NF-KB水平明顯低于A組相應時間位點的AMS、TNF-alpha、IL-6及NF-KB水平（P<0.05）。
　　2.各組胰腺組織中蛋白激酶 D1的表達情況：C組（12h位點）中蛋白激酶D1的表達明顯低于A組（12h位點）和B組（12h位點），B組(12h位點）的蛋白激酶D1表達明顯低于A組（12h位點），有

6、統計學意義（P<0.05）。A組中蛋白激酶D1表達在0-12h時間段內呈時間依賴性，即從3h位點逐漸上升，12h表達最高，而24h位點依然高表達，但低于12h位點的表達。
　　3.各組胰腺組織中Caspase3的表達情況：A組（12h位點）中的表達顯著低于B組（12h位點），但A組（12h位點）、B組（12h位點）中的表達顯著高于C組（12h位點），差異有統計學意義（P＜0.05）。
　　4.各組大鼠胰腺組織病理學評分結果：

7、C組各時間位點病理學評分明顯低于A組和B組各時間位點（P<0.01），B組各時間位點病理學評分低于A組各時間位點（P<0.01），且A組中3h位點病理評分低于6h位點，6h位點病理評分低于12h位點（P<0.05)，有統計學意義。
　　5.各組胰腺組織HE染色病理結果：C組各時間位點胰腺腺泡結構完整，間質稍有水腫，無顯著病理學改變。A組各時間位點胰腺組織充血水腫明顯，腺泡結構紊亂，可見胰腺組織壞死崩解，間隙模糊不清，有中性粒細胞及

8、紅細胞浸潤，隨時間位點的延長，有加重趨勢。B組各相應時間位點病理變化同A組相似，但充血水腫、壞死崩解程度及病理損傷程度較A組減輕。
　　6.各組胰腺組織凋亡水平結果：與C組相比較，A組、B組各時間位點的凋亡指數較高（P＜0.05）；與A組相比較，B組各時間位點的凋亡指數顯著升高（P＜0.05）。
　　結論：
　　1.蛋白激酶D1在大鼠急性胰腺炎中高表達，且在3h-12h區(qū)段呈時間依賴性；CID755673可有效地減少蛋