MTA1在肝細胞癌中的表達及臨床意義.pdf

1、目的:通過檢測腫瘤轉移相關基因1(MTA1)在肝癌組織及不同侵襲轉移潛能人肝癌細胞株中表達的差異,探討MTA1表達與肝細胞癌侵襲、轉移及生物學行為的關系。
　　 方法:
　　 1.MTA1在肝癌組織中的表達及與nm23、c-myc相關性的研究:實驗所選取的石蠟包埋肝細胞肝癌組織標本及新鮮肝細胞肝癌組織標本均來自山東大學附屬省立醫(yī)院。病例收集的原則:①所選病例的臨床資料齊全;②所選病例術前未經任何抗腫瘤治療;③所選病例均經

2、病理證實為肝細胞肝癌。30例石蠟包埋肝癌組織標本選自該院2007年1月至2008年12月經手術切除的存檔蠟塊,每例蠟塊均含有癌組織及相應癌旁組織,將所選石蠟包埋肝癌組織標本制成4～5μm厚的連續(xù)切片,用于免疫組化檢測。30例新鮮肝癌組織標本選自該院2009年1～5月經手術切除的病例,分別在新鮮肝癌癌灶中心無出血壞死部位及距癌灶邊緣3～5cm相應癌旁組織處取材,部分置于-80℃冰箱凍存?zhèn)溆?用于RNA提取;另一部分用10％福爾馬林固定24

3、小時,常規(guī)石蠟包埋,制成4～5μm厚的連續(xù)切片,用于免疫組化檢測。分別采用免疫組織化學法、半定量RT-PCR檢測肝癌組織及其相應癌旁組織中MTA1蛋白、mRNA的表達,分析其表達與臨床病理特征之間的關系,并分析MTA1蛋白表達與腫瘤轉移抑制基因nm23-H1表達蛋白及癌基因c-myc表達蛋白的相關性。
　　 2.MTA1與肝癌細胞系侵襲轉移潛能關系的研究:實驗所用的不同侵襲轉移潛能人肝癌細胞株為人正常肝細胞株L02,人肝癌細胞株

4、MHCC97-H、SMMC7721、HepG2。分別采用實時定量RT-PCR、Western blot檢測人正常肝細胞株L02,人肝癌細胞株MHCC97-H、SMMC7721、HepG2中MTAlmRNA及蛋白的表達;采用Transwell小室體外細胞侵襲實驗檢測各細胞株的侵襲轉移潛能。
　　 結果:
　　 1.免疫組織化學結果顯示,MTA1蛋白主要在細胞核中表達,呈棕黃色顆粒狀,MTA1蛋白在肝癌癌組織中陽性表達率為6

5、5.0％(39/60),明顯高于其在癌旁組織中的表達(30.0％,18/60),二者的差異有顯著統(tǒng)計學意義。MTA1蛋白在肝癌組織中的表達與腫瘤分化程度、有無肝內、外轉移或門靜脈癌栓相關。
　　 2.半定量RT-PCR結果顯示,MTA1 mRNA在肝癌組織中的平均相對表達量為(0.406±0.037),顯著高于其在相應癌旁組織中平均相對表達量(0.189±0.021),兩組之間差異有統(tǒng)計學意義。MTA1mRNA在肝癌組織中的表達

6、與腫瘤分化程度、有無肝內、外轉移或門靜脈癌栓相關,與免疫組化的結論一致。
　　 3.Spearman相關分析顯示MTA1蛋白與nm23蛋白的表達呈負相關,與c-myc蛋白的表達呈正相關。
　　 4.實時定量RT-PCR結果顯示,以人正常肝細胞株L02為對照,MTA1 mRNA在細胞株SMMC7721、MHCC97-H、HepG2的相對表達量分別為0.336,0.665,0.250。單因素方差分析表明各細胞株中MTA1 m

7、RNA表達,以MHCC97-H最高,SMMC7721次之,其次為HepG2,L02最低,且兩兩比較差異有統(tǒng)計學意義。
　　 5.Western blot凝膠圖像分析結果顯示,MTA1蛋白在細胞株L02、SMMC7721、MHCC97-H、HepG2的相對表達量分別為0.050,0.392,0.615,0.237,單因素方差分析表明各細胞株中MTA1蛋白表達,以MHCC97-H最高,SMMC7721次之,其次為HepG2,L02最

8、低,且兩兩比較差異有統(tǒng)計學意義。
　　 6.Transwell小室體外細胞侵襲實驗結果顯示,細胞株MHCC97-H、SMMC7721、HepG2、L02的平均穿膜細胞數(shù)分別為(14.17±1.18)個/高倍鏡視野,(8.83±0.53)個/高倍鏡視野,(3.26±1.04)個/高倍鏡視野,(0.00)個/高倍鏡視野,兩兩比較差異有統(tǒng)計學意義。
　　 結論:
　　 1.肝細胞肝癌組織中MTA1 mRNA和蛋白的表達

9、均顯著高于其在相應癌旁組織中的表達,且MTA1 mRNA和蛋白在肝癌組織中的表達與腫瘤分化程度、肝內、外轉移及門靜脈癌栓相關,MTA1蛋白與腫瘤轉移抑制基因nm23的表達呈負相關,與癌基因c-myc蛋白的表達呈正相關,提示MTA1可能在肝細胞肝癌的侵襲、轉移過程中發(fā)揮重要作用,三者的聯(lián)合檢測可更準確的判斷肝癌的生物學行為,有助于肝癌的基礎研究和臨床治療。
　　 2.不同侵襲轉移潛能細胞株中MTA1 mRNA和蛋白的表達均以MHC