PPARγP38、PA-1在肝細(xì)胞癌中的表達(dá)及臨床意義.pdf

1、目的:肝細(xì)胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是惡性程度很高的惡性腫瘤,是臨床工作中常見惡性腫瘤中發(fā)病率較高的一種。全球范圍內(nèi),發(fā)病率在所有新發(fā)腫瘤中位居第六位,每年因腫瘤死亡病例數(shù)中位居第三位。而且絕大多數(shù)新發(fā)病例及死亡病例位于中國大陸、東南亞及撒哈拉沙漠以南非洲地區(qū),肝細(xì)胞癌已成為這些地區(qū)的主要公共健康問題。目前在中國大陸肝細(xì)胞癌在所有因腫瘤死亡病例中位居第二位,死亡率為:26.26/100000(男:3

2、7.55/100000,女:14.45/100000)。估計(jì)每年新發(fā)肝細(xì)胞癌病例數(shù)及死亡病例數(shù)分別為:360000例及350000例。因此深入研究肝癌的發(fā)生和發(fā)展的機(jī)制,探討有效的防治途徑是目前國內(nèi)外肝癌研究的熱點(diǎn)。
　　 過氧化物酶體增殖物激活受體(peroxisome proliferator-activatedreceptors,PPARs)是核激素受體超家族中的重要成員,是一類配體依賴的核轉(zhuǎn)錄因子,與脂肪的存儲(chǔ)、分化及代

3、謝等生理過程有密切關(guān)系。目前研究確認(rèn)的PPARs有三種亞型(即PPAR-α、PPAR-γ及PPAR-δ),其中PPAR-γ是目前研究最廣泛的一種。近年來國內(nèi)外研究發(fā)現(xiàn)在多種惡性腫瘤組織中均有PPAR-γ的表達(dá)上調(diào),與惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)化關(guān)系密切。絲裂原活化蛋白激酶(Pitogen-activated protein kinase,MAPKs)信號(hào)通路在許多惡性腫瘤的生長、分化、凋亡中扮演了重要作用。生物進(jìn)化的高度保守性是MAPKs

4、信號(hào)傳導(dǎo)通路的主要特征,細(xì)胞信號(hào)通過MAPKS信號(hào)通路中的三級激酶級聯(lián)(MAPKKK-MAPKK-MAPK)形式傳導(dǎo),通過激活下游轉(zhuǎn)錄因子,將細(xì)胞外部多種刺激信號(hào)傳遞至細(xì)胞核內(nèi)的信號(hào)通路,其與細(xì)胞的增殖、分化、轉(zhuǎn)化、炎癥以及凋亡等多種生物學(xué)事件以及機(jī)體的多種生理病理過程相關(guān)。MAPKs是調(diào)控細(xì)胞生長與凋亡過程的重要信號(hào)傳導(dǎo)途徑,它包括P38MAPK通路、JNK/SAPK通路、ERK5/BMK1通路和ERK通路等主要亞型。P38MAPK信

5、號(hào)通路受細(xì)胞外信號(hào)的刺激而激活,磷酸化下游轉(zhuǎn)錄因子及作用于細(xì)胞周期,參與細(xì)胞的增殖、分化和凋亡。國外研究證實(shí)PPARs的活化與MAPKs信號(hào)通路具有密切關(guān)系。
　　 轉(zhuǎn)錄因子激活蛋白-1(activating protein-1,AP-1)是有兩部分轉(zhuǎn)錄因子組成的蛋白家族,通過亮氨酸拉鏈相結(jié)合并與DNA綁定,JUN(c-Jun,JunBand JunD)和Fos(c-Fos,FosB,Fral and Fra2)是AP-1主要組

6、成部分,在哺乳動(dòng)物主要為c-fos和c-jun。研究表明:AP-1是重要的調(diào)節(jié)蛋白,在細(xì)胞的生長、分化、轉(zhuǎn)化和凋亡過程中起重要作用,是調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖和生存的中樞。AP-1因子在惡性腫瘤過程中扮演著重要角色,通常增加AP-1的表達(dá)水平能夠增強(qiáng)靶基因的轉(zhuǎn)錄活性,調(diào)節(jié)AP-1的活性能在不同的水平影響細(xì)胞的命運(yùn)和發(fā)生,包括:二聚物組成、轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)錄后事件及輔助蛋白相互作用。最近發(fā)現(xiàn)AP-1在微環(huán)境缺氧的條件下能夠促使腫瘤血管的生成而引起腫瘤的生長。

7、
　　 本實(shí)驗(yàn)采用免疫組織化學(xué)方法聯(lián)合檢測肝細(xì)胞癌組織及正常肝組織中PPAR-γ、P38和AP-1(c-fos及c-jun)蛋白的表達(dá),分析其與肝細(xì)胞癌臨床病理特征的關(guān)系及相互關(guān)系,并結(jié)合隨訪資料初步探討它們在肝細(xì)胞癌中表達(dá)的意義及其預(yù)后價(jià)值。
　　 方法:采用河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院肝膽外科2005-2008年手術(shù)切除并經(jīng)病理證實(shí)的、隨訪資料完整的原發(fā)性肝癌標(biāo)本57例,標(biāo)本經(jīng)病理組織學(xué)證實(shí)均為肝細(xì)胞癌。所有患者術(shù)前均未經(jīng)過

8、任何抗腫瘤治療。20例正常肝組織標(biāo)本取自肝血管瘤手術(shù)組織。標(biāo)本切除離體立即固定于10％中性甲醛溶液,石蠟包埋。由兩位有經(jīng)驗(yàn)病理醫(yī)師進(jìn)行病理組織學(xué)診斷。免疫組織化學(xué)方法檢測57例肝細(xì)胞癌組織及20例正常肝組織中PPAR-γ/、P38及AP-1(c-fos及c-jun)蛋白的表達(dá),分析其與肝癌臨床病理特征的關(guān)系及相互關(guān)系,并結(jié)合隨訪資料探討它們在肝細(xì)胞癌中表達(dá)的意義及預(yù)后價(jià)值。本研究隨訪時(shí)間1.0～71.13個(gè)月,中位隨訪時(shí)間為26.1個(gè)月

9、。
　　 結(jié)果:
　　 1 PPAR-γ蛋白在肝細(xì)胞癌組織中的表達(dá)及與臨床病理特征的關(guān)系在肝細(xì)胞癌組織中,PPAR-γ蛋白的表達(dá)率為45.6％,顯著高于正常肝組織中的表達(dá)(P＜0.05)。PPAR-γ蛋白在腫瘤直徑＞5cm組(56.7％)、門靜脈癌栓組(85.7％)的陽性表達(dá)率顯著增高(P＜0.05);PPAR-γ蛋白的陽性表達(dá)率與TNM分期有關(guān),分期越晚陽性率越高(P＜0.05)。PPAR-γ蛋白表達(dá)與預(yù)后無關(guān)(x2=

10、0.009,P=0.757)。
　　 2 P38蛋白在肝細(xì)胞癌組織中的表達(dá)及與臨床病理特征的關(guān)系
　　 用免疫組織化學(xué)法檢測肝細(xì)胞癌組織顯示,P38蛋白的陽性高表達(dá)率為64.9％,表達(dá)水平有明顯升高(P＜0.05)。P38蛋白在腫瘤直徑＞5cm組、單發(fā)腫瘤組和腫瘤直徑≤5cm組、多發(fā)腫瘤組中陽性表達(dá)情況分別為:63.3％、66.0％和66.7％、60.0％,統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示均無顯著差異(P＞0.05);P38在伴有門靜脈癌

11、栓(87.5％)與無門靜脈癌栓(62.0％)的肝細(xì)胞癌組織中表達(dá)率無顯著差異(P=0.419);P38蛋白的陽性表達(dá)率與TNM分期無關(guān)(P=1.00)。P38蛋白表達(dá)與患者預(yù)后無關(guān)(x2=1.566,P=0.211)。
　　 3.AP-1(c-fos及c-jun)蛋白在肝細(xì)胞癌組織中的表達(dá)及與臨床病理特征的關(guān)系
　　 免疫組織化學(xué)檢測肝細(xì)胞癌組織發(fā)現(xiàn),c-fos蛋白的表達(dá)率為71.9％,顯著高于正常肝組織中的表達(dá)(P＜0

12、.01);c-iun蛋白的表達(dá)率為77.2％,顯著高于正常肝組織中的表達(dá)(P＜0.01);c-fos蛋白在腫瘤直徑＞5cm組、門靜脈癌栓組中的高表達(dá)率分別為:66.7％、85.7％,在腫瘤直徑≤5cm組、無門靜脈癌栓組中的高表達(dá)率分別為:77.8％、70.0％,統(tǒng)計(jì)學(xué)分析無顯著差異(P＞0.05),且與腫瘤的個(gè)數(shù)、有無轉(zhuǎn)移及TNM分期無關(guān)(P＞0.05);c-iun蛋白在腫瘤直徑>5cm組、門靜脈癌栓組中的高表達(dá)率分別為:77.8％、8

13、5.7％,在腫瘤直徑≤5cm組、無門靜脈癌栓組中的高表達(dá)率分別為:76.7％％、76.0％,統(tǒng)計(jì)學(xué)分析無顯著差異(P＞0.05),且與腫瘤的個(gè)數(shù)、有無轉(zhuǎn)移及TNM分期無關(guān)(P＞0.05);c-fos及c-jun與肝細(xì)胞癌的生存期無關(guān)(x2=0.125,P=0.724及x2=0.284,P=0.594)。
　　 4 PPARγ和P38、AP-1(c-fos及c-jun)蛋白在肝細(xì)胞癌組織中的表達(dá)相關(guān)性分析
　　 統(tǒng)計(jì)學(xué)相關(guān)

14、分析顯示:在肝細(xì)胞癌組織中,PPAR-γ蛋白與P38蛋白表達(dá)正相關(guān)(r=0.378,P=0.004);P38蛋白與c-fos蛋白表達(dá)正相關(guān)(r=0.359.P=0.006);P38蛋白與c-jun蛋白表達(dá)正相關(guān)(r=0.301,P=0.023);c-fos蛋白與c-jun蛋白的表達(dá)呈顯著正相關(guān)(r=0.498,P=0.000)。
　　 結(jié)論:
　　 1 PPAR-γ、P38、c-fos及c-jun蛋白在肝細(xì)胞癌組織中的表

15、達(dá)水平明顯高于正常肝組織。
　　 2 PPAR-γ蛋白的表達(dá)水平與肝細(xì)胞癌的腫瘤直徑、門靜脈癌栓、TNM分期等生物學(xué)行為密切相關(guān)。P38、AP-1(c-fos及c-jun)蛋白表達(dá)水平與肝癌的腫瘤直徑、門靜脈癌栓、TNM分期等生物學(xué)行為無相關(guān)性。PPAR-γ、P38、AP-1(c-fos及c-jun)在肝細(xì)胞癌中的蛋白表達(dá)水平與生存期無相關(guān)性。
　　 3 PPAR-γ蛋白與P38蛋白表達(dá)有正相關(guān)性;P38蛋白與c-fos