ezrin在人肝細胞癌及其轉(zhuǎn)移癌中的表達及臨床意義研究.pdf

1、我國是肝細胞癌(hepatocellularcarcinoma，HCC)的高發(fā)國家，肝癌死亡率居世界之首，死亡數(shù)占全球40％左右。近年來，肝癌發(fā)病年齡有提前的趨勢，30～44歲組肝癌死亡居全部惡性腫瘤死亡的第1位。因此，肝癌的防治是現(xiàn)在乃至今后我國惡性腫瘤防治研究之重點。到目前為止，外科手術(shù)仍然是肝癌最主要的治療手段。手術(shù)切除、復(fù)發(fā)再切除以及介入治療等已成為較成熟的治療模式。近年來，由于輔助治療手段及外科技術(shù)的提高，肝癌的切除率已明顯提

2、高，但患者的5年存活率卻遠遠低于1年存活率，其主要原因是肝癌的早期轉(zhuǎn)移和術(shù)后復(fù)發(fā)。因此，關(guān)于肝癌的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移研究已逐漸成為肝癌治療研究領(lǐng)域的主要課題之一。 Ezrin是位于6q25的基因Vil2的產(chǎn)物，作為小腸上皮刷狀緣細胞骨架的主要成分于20年前被Bretscher發(fā)現(xiàn)。近年來有研究表明ezrin在某些小兒腫瘤轉(zhuǎn)移過程中起了重要作用?，F(xiàn)在有越來越多的實驗和臨床證據(jù)表明ezrin和細胞黏附分子是影響細胞黏附功能和腫瘤細胞惡性演進

3、過程中的重要物質(zhì)。許多腫瘤都表達ezrin，但是我們對其在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移及預(yù)后中所起的作用知之甚少。本研究旨在通過檢測ezrin在正常肝、肝硬化組織、肝細胞癌及轉(zhuǎn)移性肝癌組織中的表達水平，結(jié)合一些臨床病理因素探討ezrin的表達水平與肝細胞癌發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移及預(yù)后的關(guān)系，為尋找肝細胞癌基因治療的新的干預(yù)靶點提供實驗和理論依據(jù)。本研究的主要內(nèi)容和結(jié)果如下： 1.用免疫組織化學(xué)SP法對24例正常肝，100例肝細胞癌及56例轉(zhuǎn)

4、移性肝癌組織中ezrin的表達進行檢測，結(jié)果顯示：(1)轉(zhuǎn)移性肝癌組織中ezrin的強陽性表達率為42.8％，顯著強于正常肝組織(0％)和肝細胞癌組織(34％)，各組織中ezrin的強陽性表達率差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。(2)ezrin的高表達與肝細胞癌的大小、分化程度及TNM分期存在相關(guān)性(P＜0.05)。 2.后期我們采用組織芯片技術(shù)作了一次旨在標準化ezrin免疫組化染色結(jié)果的實驗。芯片的組織包括：正常肝組織50

5、塊，肝細胞癌組織100塊，轉(zhuǎn)移性肝癌組織50塊。結(jié)果顯示：ezrin在三種組織芯片染色中的強陽性率分別為0，36％，46％，各組之間強陽性表達率的差異有統(tǒng)計學(xué)意義，(P＜0.05)。組織芯片染色情況的統(tǒng)計學(xué)結(jié)論與此前常規(guī)石蠟切片免疫組化染色結(jié)果一致，并且印證了第一部分實驗結(jié)果的可信性。 3.用Westernblot檢測ezrin在正常肝組織、肝硬化組織、肝細胞癌組織以及轉(zhuǎn)移性肝癌組織中的表達情況。實驗結(jié)果：以GAPDH(抗-3磷

6、酸甘油醛脫氫酶)作為標準內(nèi)參照，設(shè)定其在10μL總蛋白溶液中的含量為10.00，并且標準化所有膠片背景灰度值。WesternBlot檢測各族ezrin表達水平為：正常肝2.01±0.05；肝硬化5.38±0.46；肝細胞癌14.34±1.78；轉(zhuǎn)移性肝癌25.34±2.29。轉(zhuǎn)移性肝癌組織中ezrin的平均表達量是正常肝的12.6倍，是肝硬化的4.7倍，是肝細胞癌的1.8倍。單因素方差分析結(jié)果表明，除正常肝組與肝硬化組ezrin蛋白表達

7、量比較無顯著差別以外(P=0.427)，其余各組之間ezrin蛋白的表達量均有顯著差別(P＜0.05)。 目前國內(nèi)外文獻中，關(guān)于ezrin在肝細胞癌及其轉(zhuǎn)移癌中的表達及臨床意義的研究很少。在本研究中我們發(fā)現(xiàn)，ezrin的高表達與腫瘤低分化、直徑＞3cm及TNM分期較高的腫瘤關(guān)系密切。提示，隨著ezrin表達的逐步增強，肝細胞癌發(fā)生轉(zhuǎn)移的概率也在相應(yīng)增高。免疫組化染色及Westernblot檢測結(jié)果表明：ezrin的高表達與肝癌細