還原型谷胱甘肽對(duì)博來霉素致大鼠肺纖維化的干預(yù)作用.pdf

1、目的:間質(zhì)性肺疾病(Interstitial lung disease,ILD)包括一大組肺的彌漫性疾病,主要病變己非解剖學(xué)的肺間質(zhì),還包括肺泡上皮細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞等肺實(shí)質(zhì),病變不僅限于肺泡壁,也可以波及細(xì)支氣管?，F(xiàn)在有的學(xué)者認(rèn)為彌漫性實(shí)質(zhì)性肺疾病(diffuse parenchymal lung disease,DPLD)更貼切一些[1]。博來霉素為抗腫瘤藥物,已廣泛應(yīng)用于婦科腫瘤、淋巴瘤等化療,約10％-23％的用藥患者可出現(xiàn)肺毒

2、性,表現(xiàn)為呼吸困難、咳嗽、胸痛、肺部羅音等,導(dǎo)致非特異性肺炎和肺纖維化,甚至快速死于肺纖維化。氧化、抗氧化失衡可能在疾病的進(jìn)程中起重要作用。本試驗(yàn)旨在觀察不同劑量還原型谷胱甘肽(reduced glutathione,GSH)對(duì)博來霉素致大鼠肺纖維化的干預(yù)作用,并與傳統(tǒng)藥物糖皮質(zhì)激素進(jìn)行對(duì)照,通過測(cè)定血清中透明質(zhì)酸(hyaluronan,HA)和Ⅲ型前膠原(typeⅢ procollagen,PCⅢ)的含量以及肺組織中腫瘤壞死因子-α(

3、tumour necrosis factor-α,TNF-α)表達(dá)水平探討谷胱甘肽對(duì)博來霉素致大鼠肺纖維化的干預(yù)作用。
　　 方法:選取清潔級(jí)健康、雄性SD大鼠(河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供)90只,體重220±10g,適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后,隨機(jī)分成五組:(1)正常對(duì)照組(N組):18只,氣管內(nèi)注入0.1ml/100g生理鹽水,假造模后第一天用生理鹽水0.2ml/100g腹腔注射,1次/日,于7、14、28天各處死6只。(2)模型組

4、(A組):18只,氣管內(nèi)一次性注入博來霉素A5(5mg/kg),造模后第一天用生理鹽水0.2ml/100g腹腔注射,1次/日,于7、14、28天各處死6只。(3)激素組(B組):18只,氣管內(nèi)一次性注入博來霉素A5(5mg/kg),造模后第一天用地塞米松注射液0.5mg/kg腹腔注射,1次/日,于7、14、28天各處死6只。(4)谷胱甘肽小劑量組(C組):18只,氣管內(nèi)一次性注入博來霉素A5(5mg/kg),造模后第一天用谷胱甘肽0.1

5、g/kg腹腔注射,1次/日,于7、14、28天各處死6只。(5)谷胱甘肽大劑量組(D組):18只,氣管內(nèi)一次性注入博來霉素A5(5mg/kg),造模后第一天用谷胱甘肽0.4g/kg腹腔注射,1次/日,于7、14、28天各處死6只。各組處死前剪斷腹主動(dòng)、靜脈取血,用放射免疫方法測(cè)定血清中HA、PCⅢ,然后將右肺離斷后取右中葉由10％福爾馬林固定,用免疫組化方法檢測(cè)TNF-α,并用圖像分析系統(tǒng)測(cè)定TNF-α的平均灰度值,通過蘇木精一伊紅(H

6、E)染色、Masson膠原染色來評(píng)價(jià)治療效果,肺泡炎及肺纖維化程度按照Szapiel法分為4級(jí)(1分:無肺泡炎或無纖維化；4分:重度肺泡炎或纖維化,受累面積>50％)
　　 結(jié)果:
　　 1肺組織病理分析結(jié)果:A組模型組同一時(shí)間點(diǎn)肺泡炎程度顯著高于N組正常對(duì)照組(P<0.01),A組14天、28天肺纖維化程度均顯著高于N組(P<0.01),表明動(dòng)物模型復(fù)制成功。B組激素組和C組谷胱甘肽小劑量組肺泡炎及纖維化程度均較模型組

7、減輕,B7、C7肺泡炎程度均較A7顯著減輕(P<0.01),B14、C14肺泡炎程度均較A14顯著減輕(P<0.05),B28、C28纖維化程度均較A28顯著減輕(P<0.05),但兩者間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。D組同一時(shí)間點(diǎn)肺泡炎及肺纖維化程度較B組減輕,但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。
　　 2血清中HA含量變化:與N組比較,A組模型組、B組激素組、C組谷胱甘肽小劑量組、D組谷胱甘肽大劑量組大鼠血清中HA水平在造模后第

8、7、14天均明顯升高,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01),造模后第28天時(shí)A組、B組均有統(tǒng)計(jì)學(xué)性差異(P<0.01),谷胱甘肽各組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)；與A組比較,造模后第7天,B組激素組、谷胱甘肽各組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01),造模后第14、28天僅谷胱甘肽各組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01);干預(yù)組各組比較,同一時(shí)間點(diǎn)B組與谷胱甘肽各組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01),但谷胱甘肽各組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。
　　 3血

9、清中PCⅢ含量變化:與N組比較,A組模型組大鼠血清中PCⅢ水平在造模后第7、14天均升高,第14天達(dá)高峰,隨后下降,有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01),第28天時(shí)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)；與A組比較,造模后各時(shí)間點(diǎn)B組激素組、谷胱甘肽各組均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)；干預(yù)組各組比較,同一時(shí)間點(diǎn)B組與谷胱甘肽各組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05),谷胱甘肽各組之間亦無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。
　　 4肺組織TNF-α含量變化:

10、A組模型組大鼠肺組織TNF-α含量隨造模時(shí)間延長(zhǎng)逐漸升高,第7、14、28天時(shí)明顯高于N組(P<0.01),第28天達(dá)高峰；干預(yù)組各組大鼠TNF-α呈低水平升高趨勢(shì),升高幅度顯著減慢,造模后第7、14、28天TNF-α含量均顯著低于A組(P<0.01)。B組激素組與谷胱甘肽各組同一時(shí)間點(diǎn)TNF-α含量無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05),谷胱甘肽各組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。造模后第7天,D組谷胱甘肽大劑量組的TNF-α含量與N組比較無