沙利度胺對博來霉素致大鼠肺纖維化的干預(yù)作用及機(jī)制.pdf

1、目的：肺間質(zhì)纖維化是一種頑固且死亡率極高的肺疾病。其包括一組以進(jìn)行性、不可逆的由瘢痕形成引起的肺結(jié)構(gòu)破壞為特征的肺部疾病，最終導(dǎo)致器官功能失常，氣體交換障礙，而死于呼吸衰竭。特發(fā)性肺纖維化(IPF)是肺間質(zhì)纖維化中最常見，致死率最高的類型，診斷后平均生存三至五年。這反映了缺乏有效的治療方法來改變疾病的進(jìn)程。IPF發(fā)病機(jī)制仍為未知，并且尚無有效的治療措施。目前規(guī)范的包括皮質(zhì)類固醇和細(xì)胞毒素劑的抗炎治療療效很小，因此，迫切需要一種新的治療方

2、法。沙利度胺具有抗炎、免疫調(diào)節(jié)和抗血管生成的作用。目前已經(jīng)證實(shí)沙利度胺能夠減輕大鼠中博來霉素誘導(dǎo)的纖維化，其明確的作用機(jī)制尚不清楚。文獻(xiàn)報(bào)道，在實(shí)驗(yàn)性肺損傷動物模型中，肺損傷后纖維化的減弱伴有血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)表達(dá)的降低，提示抑制新生血管生成可能是其作用機(jī)制，同時(shí)動物模型中白介素-6(IL-6)的表達(dá)也減少，提示沙利度胺可能存在多種作用方式抑制了肺損傷后纖維化的進(jìn)程。
　　本實(shí)驗(yàn)旨在通過測量血清中轉(zhuǎn)化生長因子-β1(TG

3、F-β1)、血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)的含量以及肺組織Ⅰ型膠原蛋白的表達(dá)水平，研究沙利度胺、地塞米松對博來霉素致大鼠纖維化的干預(yù)作用，探討沙利度胺可能的作用機(jī)制。
　　方法：選取清潔級健康、SD雄性大鼠120只，由河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供，體重210±10g，適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后，隨機(jī)分為四組：(1)對照組：30只，各時(shí)間點(diǎn)10只，一次性向氣管內(nèi)注入0.1ml/100g生理鹽水，于假造模后第1日用生理鹽水灌胃(1ml/100g)

4、，1次/d，分別于7天、14天、28天各處死10只；(2)模型組：30只，各時(shí)間點(diǎn)10只，一次性向氣管內(nèi)注入博來霉素A5(5mg/kg)，于造模后第1日用生理鹽水灌胃(1ml/100g)，1次/d，分別于7天、14天、28天各處死8只、10只、8只；(3)沙利度胺組：30只，各時(shí)間點(diǎn)10只，一次性向氣管內(nèi)注入博來霉素A5(5mg/kg)，于造模后第1日以沙利度胺與生理鹽水配成終濃度為1％溶液，100mg/kg灌胃，1次/d，分別于7天、

5、14；天、28天處死10只大鼠；(4)地塞米松組：30只，各時(shí)間點(diǎn)10只，一次性向氣管內(nèi)注入博來霉素A5(5mg/kg)，在造模成功后第1日腹腔注射地塞米松(0.3mg/100g)，1次/d，分別于7天、14天、28天各處死10只。各組大鼠均小心剪斷其雙側(cè)股動脈，放血處死，并收集血液，利用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)法檢測離心血清中TGF-β1、VEGF的濃度。取下大鼠右肺下葉，于4％多聚甲醛溶液中固定，用免疫組織化學(xué)法檢測Ⅰ型膠原的

6、表達(dá)，測量并記錄每個(gè)視野陽性染色的平均積分光密度(IOD)值。通過Masson膠原染色和HE染色，間接評價(jià)肺纖維化及肺泡炎的嚴(yán)重程度，并采用Szapiel法分為4個(gè)等級。采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理所得實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。
　　結(jié)果：
　　1分析肺組織病理結(jié)果：
　　模型組：各相同時(shí)間點(diǎn)肺泡炎和纖維化嚴(yán)重程度明顯高于對照組(P＜0.01)，說明動物纖維化模型復(fù)制成功。
　　沙利度胺組：肺泡炎和纖維化嚴(yán)重程度均較模型組

7、減輕：7d、14d、28d時(shí)，肺泡炎程度較模型組明顯減輕(P＜0.01)；各相同時(shí)間點(diǎn)纖維化程度較模型組減輕(P＜0.05)。
　　地塞米松組：肺泡炎和纖維化嚴(yán)重程度均較模型組減輕：各相同時(shí)間點(diǎn)，地塞米松組肺泡炎嚴(yán)重程度較模型組明顯降低(P＜0.05)；纖維化程度較模型組7d時(shí)明顯減輕(P＜0.01)，14d、28d時(shí)均明顯減輕(P＜0.05)；
　　各相同時(shí)間點(diǎn)，地塞米松與沙利度胺組的肺泡炎和纖維化程度均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞

8、0.05)。
　　2肺組織Ⅰ型膠原蛋白的表達(dá)：(平均分光密度表示)：
　　模型組大鼠肺組織Ⅰ型膠原蛋白含量隨造模時(shí)間延長逐漸升高，28天達(dá)高峰，7天、14天、28天與對照組、沙利度胺組、地塞米松組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；沙利度胺組、地塞米松組大鼠Ⅰ型膠原蛋白含量呈低水平升高趨勢，造模后各時(shí)間點(diǎn)Ⅰ型膠原蛋白含量均明顯低于模型組(P＜0.01)；但沙利度胺組、地塞米松組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

9、　　3血清中TGF-β1、VEGF含量變化：
　　模型組大鼠血清中TGF-β1的含量均明顯高于對照組、沙利度胺組和地塞米松組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。沙利度胺組和地塞米松組各相同時(shí)間點(diǎn)血清中TGF-β1的含量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　模型組大鼠血清中VEGF的含量逐漸升高，至28天達(dá)高峰，各時(shí)間點(diǎn)其含量均明顯高于沙利度胺組和地塞米松組，7天、14天、28天與對照組、沙利度胺組、地塞米松組相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0

10、.01)；沙利度胺組和地塞米松組各相同時(shí)間點(diǎn)血清中VEGF含量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　結(jié)論：
　　1沙利度胺、地塞米松在博萊霉素誘導(dǎo)的大鼠肺纖維化的模型中，能夠減少肺間質(zhì)的膠原沉積，對博萊霉素誘導(dǎo)的大鼠肺纖維化具有一定的治療作用。
　　2沙利度胺在博萊霉素誘導(dǎo)的大鼠肺纖維化模型中具有與地塞米松相似的抗纖維化作用，其機(jī)制可能是通過抑制細(xì)胞因子TGF-β1、VEGF的表達(dá)，從而減輕早期的炎癥反應(yīng)和血管形成，