沙利度胺對博來霉素致大鼠肺纖維化的干預作用及機制.pdf

1、目的：肺間質纖維化是一種頑固且死亡率極高的肺疾病。其包括一組以進行性、不可逆的由瘢痕形成引起的肺結構破壞為特征的肺部疾病，最終導致器官功能失常，氣體交換障礙，而死于呼吸衰竭。特發(fā)性肺纖維化(IPF)是肺間質纖維化中最常見，致死率最高的類型，診斷后平均生存三至五年。這反映了缺乏有效的治療方法來改變疾病的進程。IPF發(fā)病機制仍為未知，并且尚無有效的治療措施。目前規(guī)范的包括皮質類固醇和細胞毒素劑的抗炎治療療效很小，因此，迫切需要一種新的治療方

2、法。沙利度胺具有抗炎、免疫調節(jié)和抗血管生成的作用。目前已經(jīng)證實沙利度胺能夠減輕大鼠中博來霉素誘導的纖維化，其明確的作用機制尚不清楚。文獻報道，在實驗性肺損傷動物模型中，肺損傷后纖維化的減弱伴有血管內皮生長因子(VEGF)表達的降低，提示抑制新生血管生成可能是其作用機制，同時動物模型中白介素-6(IL-6)的表達也減少，提示沙利度胺可能存在多種作用方式抑制了肺損傷后纖維化的進程。
　　本實驗旨在通過測量血清中轉化生長因子-β1(TG

3、F-β1)、血管內皮生長因子(VEGF)的含量以及肺組織Ⅰ型膠原蛋白的表達水平，研究沙利度胺、地塞米松對博來霉素致大鼠纖維化的干預作用，探討沙利度胺可能的作用機制。
　　方法：選取清潔級健康、SD雄性大鼠120只，由河北醫(yī)科大學實驗動物中心提供，體重210±10g，適應性飼養(yǎng)一周后，隨機分為四組：(1)對照組：30只，各時間點10只，一次性向氣管內注入0.1ml/100g生理鹽水，于假造模后第1日用生理鹽水灌胃(1ml/100g)

4、，1次/d，分別于7天、14天、28天各處死10只；(2)模型組：30只，各時間點10只，一次性向氣管內注入博來霉素A5(5mg/kg)，于造模后第1日用生理鹽水灌胃(1ml/100g)，1次/d，分別于7天、14天、28天各處死8只、10只、8只；(3)沙利度胺組：30只，各時間點10只，一次性向氣管內注入博來霉素A5(5mg/kg)，于造模后第1日以沙利度胺與生理鹽水配成終濃度為1％溶液，100mg/kg灌胃，1次/d，分別于7天、

5、14；天、28天處死10只大鼠；(4)地塞米松組：30只，各時間點10只，一次性向氣管內注入博來霉素A5(5mg/kg)，在造模成功后第1日腹腔注射地塞米松(0.3mg/100g)，1次/d，分別于7天、14天、28天各處死10只。各組大鼠均小心剪斷其雙側股動脈，放血處死，并收集血液，利用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)法檢測離心血清中TGF-β1、VEGF的濃度。取下大鼠右肺下葉，于4％多聚甲醛溶液中固定，用免疫組織化學法檢測Ⅰ型膠原的

6、表達，測量并記錄每個視野陽性染色的平均積分光密度(IOD)值。通過Masson膠原染色和HE染色，間接評價肺纖維化及肺泡炎的嚴重程度，并采用Szapiel法分為4個等級。采用SPSS13.0統(tǒng)計學軟件處理所得實驗數(shù)據(jù)。
　　結果：
　　1分析肺組織病理結果：
　　模型組：各相同時間點肺泡炎和纖維化嚴重程度明顯高于對照組(P＜0.01)，說明動物纖維化模型復制成功。
　　沙利度胺組：肺泡炎和纖維化嚴重程度均較模型組

7、減輕：7d、14d、28d時，肺泡炎程度較模型組明顯減輕(P＜0.01)；各相同時間點纖維化程度較模型組減輕(P＜0.05)。
　　地塞米松組：肺泡炎和纖維化嚴重程度均較模型組減輕：各相同時間點，地塞米松組肺泡炎嚴重程度較模型組明顯降低(P＜0.05)；纖維化程度較模型組7d時明顯減輕(P＜0.01)，14d、28d時均明顯減輕(P＜0.05)；
　　各相同時間點，地塞米松與沙利度胺組的肺泡炎和纖維化程度均無統(tǒng)計學意義(P＞

8、0.05)。
　　2肺組織Ⅰ型膠原蛋白的表達：(平均分光密度表示)：
　　模型組大鼠肺組織Ⅰ型膠原蛋白含量隨造模時間延長逐漸升高，28天達高峰，7天、14天、28天與對照組、沙利度胺組、地塞米松組相比差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)；沙利度胺組、地塞米松組大鼠Ⅰ型膠原蛋白含量呈低水平升高趨勢，造模后各時間點Ⅰ型膠原蛋白含量均明顯低于模型組(P＜0.01)；但沙利度胺組、地塞米松組之間差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。

9、　　3血清中TGF-β1、VEGF含量變化：
　　模型組大鼠血清中TGF-β1的含量均明顯高于對照組、沙利度胺組和地塞米松組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。沙利度胺組和地塞米松組各相同時間點血清中TGF-β1的含量差異無統(tǒng)計學意義。
　　模型組大鼠血清中VEGF的含量逐漸升高，至28天達高峰，各時間點其含量均明顯高于沙利度胺組和地塞米松組，7天、14天、28天與對照組、沙利度胺組、地塞米松組相比差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0

10、.01)；沙利度胺組和地塞米松組各相同時間點血清中VEGF含量差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　結論：
　　1沙利度胺、地塞米松在博萊霉素誘導的大鼠肺纖維化的模型中，能夠減少肺間質的膠原沉積，對博萊霉素誘導的大鼠肺纖維化具有一定的治療作用。
　　2沙利度胺在博萊霉素誘導的大鼠肺纖維化模型中具有與地塞米松相似的抗纖維化作用，其機制可能是通過抑制細胞因子TGF-β1、VEGF的表達，從而減輕早期的炎癥反應和血管形成，