大鼠晶狀體損傷促進(jìn)視神經(jīng)損傷后視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞存活機(jī)制的研究.pdf

1、外傷性視神經(jīng)病變(Traumatic optic neuropathy，TON)是眼眶、顱腦及面部外傷的嚴(yán)重并發(fā)癥，往往導(dǎo)致不可治愈的原發(fā)性或繼發(fā)性盲目。長(zhǎng)期以來，關(guān)于外傷性視神經(jīng)病變的治療一直存在著爭(zhēng)議。理論上講，最終解決這一問題的唯一途徑就是使受損的視神經(jīng)重新再生。視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞(Retina ganglioncells，RGCs)的存活和其軸突再生有著密切的關(guān)系，因此對(duì)于視神經(jīng)損傷后如何保護(hù)和挽救RGCs存活和促進(jìn)其軸突再生已成

2、為當(dāng)前國(guó)內(nèi)外研究的熱點(diǎn)。
　　 近年來，Leon和Fischer等研究發(fā)現(xiàn)，大鼠晶狀體的損傷能極大地促進(jìn)視神經(jīng)損傷后RGCs的存活及大量軸突再生通過視神經(jīng)斷端。已有研究證實(shí)鼠類視網(wǎng)膜內(nèi)Müller細(xì)胞提取液(Murine Müller cells conditioned medium，MMG)可促進(jìn)離體培養(yǎng)的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞存活及軸突的生長(zhǎng)，但是晶狀體損傷能否會(huì)使視神經(jīng)損傷大鼠的視網(wǎng)膜中Müller細(xì)胞的表達(dá)發(fā)生變化一直鮮見報(bào)道

3、。本實(shí)驗(yàn)采用動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的方法進(jìn)行這方面的研究。
　　 目的：研究Müller細(xì)胞在晶狀體損傷促進(jìn)視神經(jīng)橫斷傷后RGCs存活中的變化及作用。
　　 方法：選用健康成年Wistar大鼠作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，共40只。隨機(jī)分為3組：正常對(duì)照組8只，單純損傷組16只，聯(lián)合損傷組16只。正常對(duì)照組大鼠飼養(yǎng)7天后處死，其余2組分別在術(shù)后7天和14天各處死相應(yīng)的大鼠8只。HE染色觀察視網(wǎng)膜組織形態(tài)學(xué)的變化，通過免疫組化方法用神經(jīng)膠質(zhì)原纖維酸性蛋

4、白(glial fibrillary acidic proteln，GFAP)標(biāo)記視網(wǎng)膜內(nèi)Müller細(xì)胞，顯微鏡下觀察各組大鼠各時(shí)間點(diǎn)視網(wǎng)膜內(nèi)RGCs數(shù)量及GFAP陽性Müller細(xì)胞表達(dá)變化。
　　 結(jié)果：
　　 1.正常大鼠視網(wǎng)膜各層次清晰，神經(jīng)纖維層排列規(guī)則，RGCs大多為單層排列，細(xì)胞間無炎癥細(xì)胞，細(xì)胞計(jì)數(shù)為52.98±1.90。
　　 術(shù)后第7天，單純損傷組存活RGCs數(shù)為36.61±1.69，其丟失

5、率為30.90％；聯(lián)合損傷組存活RGCs數(shù)為50.76±2.77，其丟失率為4.19％；3組中存活RGCs數(shù)量?jī)蓛杀容^，除正常對(duì)照組和聯(lián)合損傷組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.053)外，其余兩兩比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000)。術(shù)后第14天，單純損傷組存活RGCs數(shù)為22.67±1.94，其丟失率為57.22％；聯(lián)合損傷組存活RGCs數(shù)為35.69±1.80，其丟失率為32.62％；3組中存活RGCs數(shù)量?jī)蓛杀容^，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意

6、義(P=0.000)。
　　 2.正常組視網(wǎng)膜中，Müller細(xì)胞胞體所在的內(nèi)核層GFAP著色不明顯，神經(jīng)纖維層見淺棕色斑點(diǎn)狀著色，RGCs的胞膜著色不明顯，內(nèi)叢狀層可見少量與視網(wǎng)膜垂直的細(xì)絲狀淺棕色著色。
　　 術(shù)后第7天，單純損傷組視網(wǎng)膜內(nèi)核層可見陽性細(xì)胞，陽性細(xì)胞數(shù)為29.38±2.04，呈淺棕色，可見胞體和突起的肥大。神經(jīng)纖維層及RGCs胞膜亦可見斑點(diǎn)狀著色，內(nèi)叢狀層、外叢狀層、外核層及色素細(xì)胞層亦可見GFAP陽

7、性著色。術(shù)后第7天，聯(lián)合損傷組視網(wǎng)膜內(nèi)核層中陽性細(xì)胞數(shù)為48.96±2.80，呈深棕色，且伴有陽性細(xì)胞胞體和突起的肥大。單純損傷組和聯(lián)合損傷組陽性細(xì)胞數(shù)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000)。
　　 術(shù)后第14天，單純損傷組視網(wǎng)膜內(nèi)陽性細(xì)胞數(shù)為19.07±2.14，但未見胞體和突起的肥大。較同組7天時(shí)陽性細(xì)胞數(shù)量下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000)。聯(lián)合損傷組術(shù)后第14天陽性細(xì)胞數(shù)為46.73±1.50，與同組第7天相比，差異無

8、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.067)，且都伴有陽性細(xì)胞胞體和突起的肥大。術(shù)后第14天，單純損傷組和聯(lián)合損傷組陽性細(xì)胞數(shù)差異亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000)。
　　 結(jié)論：
　　 1.視神經(jīng)橫斷傷后，隨著時(shí)間的推移RGCs進(jìn)行性丟失。
　　 2.晶狀體損傷可顯著促進(jìn)視神經(jīng)橫斷傷后RGCs的存活，且這種保護(hù)作用在損傷的早期更強(qiáng)。
　　 3.晶狀體損傷可顯著促進(jìn)視神經(jīng)損傷后視網(wǎng)膜內(nèi)Müller細(xì)胞GFAP的活化，且活化