銀杏葉提取物對大鼠視神經(jīng)損傷后視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞線粒體跨膜電位及視網(wǎng)膜組織中熱休克蛋白表達(dá)的影響.pdf

1、目的:視神經(jīng)損傷是一種視力損傷嚴(yán)重、預(yù)后較差的視神經(jīng)病變，其治療方法少、治療效果差。探求視神經(jīng)損傷后修復(fù)再生的方法，謀求改善視神經(jīng)功能的策略一直是眼科研究的熱點(diǎn)，但目前尚缺乏安全、有效的治療藥物。越來越多的證據(jù)表明，銀杏葉提取物(Ginkgo Bilobaextract，EGb761)具有抗氧化、抗缺血、保護(hù)線粒體、抑制一氧化氮合酶、抑制谷氨酸毒性以及抑制血小板活化因子等多種作用，且長期應(yīng)用未發(fā)現(xiàn)其毒、副作用，是一種有潛力并且可以長期應(yīng)

2、用的視功能保護(hù)劑。
　　本研究通過建立大鼠視神經(jīng)不完全損傷模型，腹腔注射銀杏葉提取物，來觀察視神經(jīng)損傷后，銀杏葉提取物對視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞(retinalganglion cell，RGCs)線粒體跨膜電位(mitochondrial transm embranepotentials，△ψm)變化及視網(wǎng)膜組織中熱休克蛋白(heatshock proteins，HSPs)27表達(dá)的影響，從而探討銀杏葉提取物對外傷性視神經(jīng)損傷的作用，進(jìn)

3、而為銀杏葉提取物臨床治療視神經(jīng)損傷提供理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法:清潔級健康SD大鼠60只，雌雄不限，體重250g±10g。常規(guī)眼部檢查無眼疾。隨機(jī)分為3組，正常對照組（正常組）20只（20眼），實(shí)驗(yàn)對照組（對照組）20只（20眼），實(shí)驗(yàn)治療組（治療組）20只(20眼)。正常組不做任何處理。對照組和治療組建立左眼視神經(jīng)損傷模型，造模后1小時開始，治療組給予0.35％銀杏葉提取物(100mg/kg)，生理鹽水配置腹腔注射[2，3

4、]，對照組給予同治療組體積的生理鹽水直接腹腔注射，此后每日一次，至試驗(yàn)結(jié)束。于實(shí)驗(yàn)3d、7d、14d、28d，每組各取5眼的動物視網(wǎng)膜組織，用HE染色觀察各組視網(wǎng)膜組織形態(tài)學(xué)的改變、免疫組織化學(xué)染色觀察熱休克蛋白27的表達(dá)情況、流式細(xì)胞術(shù)測定視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞線粒體跨膜電位的變化。研究中計(jì)量資料均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（(x)±s））表示，采用方差分析，計(jì)數(shù)資料采用x2檢驗(yàn)，應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行分析，以P＜0.05為差異有顯著性。<

5、br>　　結(jié)果:
　　1視網(wǎng)膜組織HE染色
　　正常組:視網(wǎng)膜各細(xì)胞層、內(nèi)核層及外核層的細(xì)胞排列致密，結(jié)構(gòu)清晰可見，邊界清楚;對照組:各時間點(diǎn)RGCs排列紊亂，數(shù)量不同程度的減少，在損傷3d、7d,部分細(xì)胞可出現(xiàn)水腫及空泡樣變化，隨著損傷時間延長，大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層的胞核明顯變稀疏、變薄且排列紊亂，內(nèi)核層和外核層也不同程度的減少;治療組亦可見上述改變，但其各時間點(diǎn)均較對照組的3d、7d、14d、28d時間點(diǎn)損傷情況輕，其

6、中14d損傷的情況明顯明顯輕于3d、7d和28d。
　　2熱休克蛋白27免疫組織化學(xué)染色:
　　HSPs27的表達(dá)可位于視網(wǎng)膜神經(jīng)纖維層，其強(qiáng)陽性表達(dá)呈棕色。正常組實(shí)驗(yàn)中所見呈現(xiàn)弱陽性表達(dá)淺黃色染色，各個時間點(diǎn)無明顯變化;對照組3d為弱陽性表達(dá)呈淺黃染色，7d染色加深，14d達(dá)高峰呈強(qiáng)陽性表達(dá)棕色，28d染色呈淺黃色;實(shí)驗(yàn)組各時間點(diǎn)陽性表達(dá)均弱于對照組，但明顯強(qiáng)于正常組。
　　免疫組織化學(xué)的半定量檢測結(jié)果:正常組3d、

7、7d、14d及28d的半定量檢測結(jié)果分別為:0.113±0.015、0.117±0.009、0.115±0.124、0.117±0.006;對照組各時間點(diǎn)的半定量檢測結(jié)果分別為:0.424±0.031、0.538±0.073、0.337±0.022、0.252±0.014;治療組各時間點(diǎn)的半定量檢測結(jié)果分別為:0.330±0.021、0.327±0.183、0.211±0.015、0.172±0.007。在實(shí)驗(yàn)的3d、7d、14d及28

8、d，對照組和治療組HSPs27的陽性表達(dá)較正常組顯著升高，治療組較對照組HSPs27的陽性表達(dá)各時間點(diǎn)顯著降低，差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　3流式細(xì)胞術(shù)檢測視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞線粒體跨膜電位
　　正常組正常大鼠RGC△ψm為825.648±5.822;對照組:3d、7d、14 d、28d，RGC△ψm為分別為714.574±6.386、633.108±6.305、657.360±4.879、698.838±5.63

9、0，各時間點(diǎn)的△ψm均明顯低于正常組，且各時間點(diǎn)間△ψm差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05）;治療組:3d、7d、14d、28d，RGC△ψm為分別為784.879±6.424、732.538±4.851、755.698±6.993、766.769±5.134，各時間點(diǎn)的△ψm均低于對照組，但高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05）。
　　結(jié)論:
　　1視神經(jīng)損傷后RGCs排列紊亂，細(xì)胞數(shù)量不同程度的減少。
　　2視神