14-3-3epsilon在喉癌中表達(dá)和功能研究.pdf

1、頭頸部鱗狀細(xì)胞癌(Squamous Cell Carcinoma of Head and Neck,SCCHN)被世界公認(rèn)為第六大腫瘤,在世界范圍內(nèi)每年報道50多萬新增病例。喉痛是呼吸道第二大常見惡性腫瘤,占所有惡性腫瘤的2％～3％,在我國,特別是東北地區(qū),喉癌的發(fā)病率呈逐年上升趨勢。早期喉癌通常以單純放療或手術(shù)切除為主,對于進(jìn)展期喉癌,在世界范圍內(nèi),全喉切除術(shù)仍然是首選的治療方法。5-氮雜胞苷(5-azacytidine)或5-脫氧氮

2、雜胞苷(5-aza-deoxy-cytidine,5AZA-CDR)是DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑。5-氮雜胞苷通過降低基因啟動子區(qū)域的甲基化程度,使某些因啟動子區(qū)被甲基化而失活的腫瘤抑制基因被重新激活,可達(dá)到治療腫瘤的目的。
　　 前期,我們利用二維電泳(TWO dimensional electrophoresis,2-DE)和質(zhì)譜技術(shù)對經(jīng)5-Aza-CdR處理前后的喉癌Hep-2細(xì)胞系進(jìn)行篩查,鑒定出若干表達(dá)差異蛋白如14-3-

3、3epsilon等。14-3-3epsilon參與多種生物過程如細(xì)胞周期、細(xì)胞增殖以及細(xì)胞凋亡等的調(diào)控,并且在神經(jīng)發(fā)生以及惡性腫瘤形成的過程中具有重要的作用。
　　 目前,14-3-3epsilon在喉癌發(fā)生中的功能以及調(diào)節(jié)機(jī)制并不十分清楚,因此,本研究將通過對14-3-3epsilon在LSCC中的表達(dá)及生物特性的分析,探討14-3-3epsilon在喉鱗狀細(xì)胞癌(laryngeal squamous cell carcino

4、ma,Lscc)的發(fā)生和發(fā)展中的作用。
　　 材料與方法
　　 以喉鱗癌組織標(biāo)本為實(shí)驗(yàn)材料,應(yīng)用RT-PCR和Western Blot檢測喉鱗癌組織中14-3-3epsilon基因的表達(dá)水平,應(yīng)用統(tǒng)計學(xué)方法分析臨床資料與14-3-3epsilon表達(dá)水平之間的關(guān)系。
　　 構(gòu)建14-3-3epsilon.GFP表達(dá)載體,轉(zhuǎn)染喉癌細(xì)胞系Hep-2,通過熒光顯微鏡和RT-PCR觀察并檢測轉(zhuǎn)染前后Hep-2細(xì)胞中14-

5、3-3epsilon基因表達(dá)水平。應(yīng)用MTT、流式細(xì)胞術(shù)、Transwell分別檢測過表達(dá)14-3-3epsilon基因?qū)ep-2細(xì)胞增殖能力、細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡水平以及體外侵襲能力等生物學(xué)特性的影響。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
　　 1、在喉癌組織中,14-3-3epsilon mRNA及蛋白質(zhì)表達(dá)水平明顯低于癌旁對照組織;14-3-3epsilon蛋白質(zhì)在轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中的表達(dá)水平較喉癌組織中的表達(dá)水平更低;14-3-3epsi

6、lon蛋白質(zhì)在喉癌臨床Ⅲ期或Ⅳ期癌組織中的表達(dá)水平明顯低于在I期或Ⅱ期癌組織中的表達(dá)水平。
　　 2、構(gòu)建重組表達(dá)載體14-3-3epsilon-GFP,經(jīng)雙酶切及菌液測序檢測,結(jié)果準(zhǔn)確無誤。
　　 3、與空白對照組相比,在轉(zhuǎn)染GFP組及14-3-3epsilon-GFP組中,Hep-2活細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)分別為71.68±12.10％和36.68±14.09％(P<0.05)。
　　 4、空白對照組、轉(zhuǎn)染GFP組和轉(zhuǎn)

7、染14-3-3epsilon-GFP組中,Hep-2細(xì)胞處于細(xì)胞周期S期的百分?jǐn)?shù)分別為22.47±3.36％,28.17±3.97％和46.15±6.82％(P<0.05),處于凋亡亞G1期的百分?jǐn)?shù)分別為1.23±1.02％,2.92±1.59％和13.72±3.89％fP<0.05)。
　　 5、在空白對照組、轉(zhuǎn)染GFP組和轉(zhuǎn)染14-3-3epsilon-GFP組中,晚期凋亡細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)分別為0.84±0.25％,1.08±0

8、.24％以及2.93±0.13％(P<0.001)。
　　 6、在空白對照組、轉(zhuǎn)染GFP組以及轉(zhuǎn)染14-3-3epsilon-GFP組中,穿過Transwell小室濾膜的細(xì)胞數(shù)分別為20.65±1.94,17.63±1.04以及9.1±0.24(P<0.001)。
　　 結(jié)論：1、14-3-3epsilon在喉癌中的低表達(dá)促進(jìn)了喉癌的發(fā)生及進(jìn)展。2、14-3-3epsilon在喉癌中具有促進(jìn)癌細(xì)胞凋亡以及抑制癌細(xì)胞侵襲的