14-3-3β在卵巢漿液性癌中的表達及其功能的初步研究.pdf

1、背景：卵巢癌是女性生殖器常見的三大惡性腫瘤之一，其中，上皮性卵巢癌最為常見。上皮性卵巢癌發(fā)病隱匿，早期沒有明顯的臨床癥狀及體征，且缺乏有效的篩查及診斷方法，超過70％的患者確診時已處于晚期，其5年生存率僅約30%，已嚴重的威脅了廣大女性的生命健康。因此，研究卵巢癌的發(fā)病機制，尋找早期篩查、診斷相關(guān)的生物標記物，及有效的治療靶點是目前亟需解決的問題。14-3-3蛋白是一類高度保守的小分子酸性多肽，分子量約為28-33 kDa，廣泛存在于真

2、核生物體內(nèi)。到目前為止，超過200個14-3-3蛋白的結(jié)合配體被證實，通過調(diào)節(jié)各種結(jié)合配體的功能，14-3-3蛋白參與調(diào)節(jié)很多重要的細胞過程，如細胞分化，增殖，信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，囊泡運輸?shù)取Ｔ絹碓蕉嗟难芯孔C實14-3-3蛋白家族與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展有著密切聯(lián)系，在腫瘤的生長和進展中發(fā)揮著重要的作用?；谇捌诘难芯炕A(chǔ)，本實驗擬檢測14-3-3β蛋白在卵巢漿液性腺癌組織中的表達，進一步探索其對漿液性卵巢癌細胞生物學(xué)功能的影響。
　　目的：檢

3、測14-3-3β蛋白在卵巢漿液腺癌組織中的表達情況，分析14-3-3β的表達與卵巢漿液性腺癌臨床病理特征之間的關(guān)系；通過轉(zhuǎn)染14-3-3β過表達和干擾質(zhì)粒，改變卵巢癌細胞中14-3-3β蛋白的表達水平，進而觀察該基因?qū)β殉舶┘毎飳W(xué)行為的影響，探究14-3-3β蛋白在卵巢癌的發(fā)展進程中發(fā)揮的生物學(xué)作用。
　　方法：
　　1.免疫組織化學(xué)法檢測14-3-3β在100例卵巢漿液性腺癌、49例卵巢漿液性腺瘤和54例正常輸卵管傘端

4、組織標本中的表達水平，采用統(tǒng)計方法分析14-3-3β的表達與卵巢漿液性腺癌臨床病理特征之間的關(guān)系。
　　2.轉(zhuǎn)染14-3-3β過表達和干擾質(zhì)粒到卵巢癌HO8910細胞中，利用實時熒光定量PCR和Western blot方法檢測轉(zhuǎn)染后細胞中14-3-3β的表達情況。
　　3.對轉(zhuǎn)染過表達及干擾質(zhì)粒的卵巢癌HO8910細胞進行功能學(xué)實驗：采用MTT法檢測14-3-3β對腫瘤細胞增殖能力的影響；Transwell實驗檢測14-3-

5、3β對腫瘤細胞遷移及侵襲能力的影響；劃痕實驗檢測14-3-3β對腫瘤細胞劃痕愈合能力的影響；細胞流式實驗檢測14-3-3β對腫瘤細胞周期及凋亡的影響。
　　結(jié)果：
　　1.免疫組化結(jié)果發(fā)現(xiàn)：14-3-3β在卵巢漿液性腺癌中的陽性表達率為45%（45/100），在卵巢漿液性腺瘤中的陽性表達率為6.5%（3/49）,在正常輸卵管傘端中的陽性表達率為7.4%（4/54）。14-3-3β在腺癌組織中的陽性表達率顯著高于腺瘤和輸卵管傘

6、端組織，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.005）。14-3-3β的陽性表達與患者年齡呈正相關(guān)，而與腫瘤細胞的分化，F(xiàn)IGO分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無明顯關(guān)聯(lián)。
　　2.與空白對照組和空質(zhì)粒組相比較，轉(zhuǎn)染14-3-3β過表達質(zhì)粒的卵巢癌HO8910細胞內(nèi)14-3-3β在mRNA水平和蛋白水平表達量均顯著上調(diào)；轉(zhuǎn)染14-3-3β干擾質(zhì)粒的卵巢癌HO8910細胞內(nèi)14-3-3β在mRNA水平和蛋白水平表達量均顯著降低。
　　3.與對照組相比較

7、，轉(zhuǎn)染14-3-3β過表達質(zhì)粒可促進卵巢癌HO8910細胞的遷移及侵襲，促進劃痕的愈合，抑制癌細胞的凋亡，但是對癌細胞的增殖能力和細胞周期無明顯影響。
　　4.與對照組相比較，轉(zhuǎn)染14-3-3β干擾質(zhì)粒可抑制卵巢癌HO8910細胞的遷移及侵襲，減緩劃痕的愈合，促進癌細胞的凋亡，對癌細胞的增殖能力和細胞周期無明顯影響。
　　結(jié)論：
　　1.14-3-3β在卵巢漿液性腺癌組織中的陽性表達率顯著高于腺瘤和輸卵管傘端組織，可能