巨噬細(xì)胞在兔耳創(chuàng)面愈合及瘢痕形成中的作用.pdf

1、研究背景與目的：
　　病理性瘢痕主要包括增生性瘢痕和瘢痕疙瘩,是人體創(chuàng)傷、炎癥、燒傷、外科或自發(fā)的一種過度的皮膚纖維增生性疾病。病理性瘢痕的形成給患者帶來了很多的臨床問題,包括:影響外觀、瘢痕組織嚴(yán)重的瘙癢、疼痛、感覺異常、睡眠質(zhì)量下降、關(guān)節(jié)部位的瘢痕攣縮造成該關(guān)節(jié)的運(yùn)動受限、外觀上的影響還可能給許多患者造成心理上的障礙等,這些最終導(dǎo)致了患者生活質(zhì)量的下降。整形外科最基本的問題就是瘢痕防治問題,而目前病理性瘢痕的發(fā)病機(jī)制尚未完全闡

2、明,臨床上缺乏有效防治病理性瘢痕的方法,深入研究病理性瘢痕形成的機(jī)制,對病理性瘢痕的防治具有重要意義。
　　近年來,隨著免疫組織化學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)及分子生物化學(xué)等科學(xué)技術(shù)的發(fā)展,大量的研究提示病理性瘢痕的發(fā)生發(fā)展與創(chuàng)傷組織的細(xì)胞、細(xì)胞外基質(zhì)及細(xì)胞因子數(shù)量及構(gòu)成改變有關(guān)。由于在創(chuàng)傷修復(fù)及瘢痕形成過程中,多種細(xì)胞及生物活性物質(zhì)相互作用,單一細(xì)胞及其亞群在創(chuàng)傷修復(fù)及瘢痕形成過程中的作用尚未完全闡明。其中巨噬細(xì)胞參與了創(chuàng)傷修復(fù)及瘢痕形成的全

3、過程,激活的巨噬細(xì)胞通過分泌一系列的生物活性物質(zhì)調(diào)節(jié)著創(chuàng)傷愈合及瘢痕形成過程中成纖維細(xì)胞的增殖與凋亡、細(xì)胞外基質(zhì)的合成與降解及血管形成等一系列生物學(xué)過程。因此,深入研究巨噬細(xì)胞在創(chuàng)傷愈合及瘢痕形成中的作用對進(jìn)一步揭示創(chuàng)傷修復(fù)及病理性瘢痕形成的機(jī)制具有重要意義。
　　本實(shí)驗(yàn)觀察研究早期全身清除單核/巨噬細(xì)胞對兔耳創(chuàng)面愈合及增生性瘢痕形成的影響,探討巨噬細(xì)胞在創(chuàng)傷修復(fù)及病理性瘢痕形成中的作用及其機(jī)制。
　　方法：
　　采用

4、兔耳耳緣靜脈注射Cl2MDP-Lip方法全身清除單核/巨噬細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)分為兩組:①實(shí)驗(yàn)組(5只),在制作兔耳腹側(cè)創(chuàng)面前1天及術(shù)后第1天靜脈注射Cl2MDP-Lip原液(2.5ml/kg);②對照組(5只),同上述實(shí)驗(yàn)組時間點(diǎn)靜脈注射0.1MPBS(2.5ml/kg)。各組分別于術(shù)后第3天、第7天、第28天、第56天及第84天切取創(chuàng)面瘢痕組織,將兔耳創(chuàng)面或增生性瘢痕組織平均分為兩份,一份置于4％多聚甲醛固定,另一份置于RNA保存液(RNAl

5、ater)-80°C冰箱保存供后續(xù)研究用。觀察兔耳創(chuàng)面愈合及瘢痕形成情況,并對兩組標(biāo)本進(jìn)行組織切片,檢測分析創(chuàng)面瘢痕組織增生程度、瘢痕組織中巨噬細(xì)胞浸潤及PCNA表達(dá)的情況。
　　結(jié)果：
　　1.創(chuàng)面從術(shù)后第1天即開始有血痂覆蓋,所有創(chuàng)面均未見明顯感染征象,實(shí)驗(yàn)組與對照組創(chuàng)面最終均能愈合,但實(shí)驗(yàn)組創(chuàng)面較對照組創(chuàng)面愈合時間較短(P<0.05)。
　　2.術(shù)后第28天瘢痕組織中瘢痕增生指數(shù)達(dá)最大,而將兩組各時間段瘢痕增生指

6、數(shù)分別比較時,其中術(shù)后第28天及術(shù)后第56天實(shí)驗(yàn)組較對照組高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　3.術(shù)后第7天,創(chuàng)面巨噬細(xì)胞浸潤數(shù)量最多,術(shù)后第14天巨噬細(xì)胞浸潤數(shù)量減少,術(shù)后第28天偶可見少量巨噬細(xì)胞,術(shù)后第7天及術(shù)后第14天兩個時間點(diǎn)對照組巨噬細(xì)胞浸潤數(shù)量均較實(shí)驗(yàn)組多(P<0.01)。
　　4.術(shù)后第7天兩組創(chuàng)面組織PCNA表達(dá)量最高,以后逐漸減弱。在術(shù)后第7天、第14天,實(shí)驗(yàn)組創(chuàng)面組織中PCNA表達(dá)均較對照組要強(qiáng)