RhaFGF聯(lián)合rhEGF促進兔耳全層皮膚缺損創(chuàng)面愈合的實驗研究.pdf

1、目的:觀察重組人酸性成纖維細胞生長因子(rhaFGF)聯(lián)合重組人表皮細胞生長因子(rhEGF)對創(chuàng)面愈合的影響并探討其可能的機理。
　　 方法:①造模及分組:建立新西蘭大耳白兔兔耳全層皮膚缺損模型,先后進行濃度梯度實驗和聯(lián)合用藥實驗。在濃度梯度實驗中,建立兔耳全層皮膚缺損創(chuàng)面模型,隨機分為A組(rhaFGF60U/cm2)、B組(rhaFGF90U/cm2)、C組(rhEGF20U/cm2)、D組(rhEGF40U/cm2)和E

2、組(等量生理鹽水)共5組。根據(jù)濃度梯度實驗結果設定聯(lián)合用藥實驗試劑的濃度。聯(lián)合用藥實驗建立模型同前,隨機分為F組(rhaFGF60U/cm2+rhEGF20U/cm2)、G組(rhaFGF60U/cm2)、H組(hbFGF60U/cm2)和I組(等量生理鹽水)共4組。②實驗方法:造模后即開始用藥,每隔兩日按不同分組將試劑外用于創(chuàng)面。③實驗評估:采用透明膜描記法記錄造模后第3、7、10、14d創(chuàng)面愈合面積,計算出創(chuàng)面愈合率,記錄創(chuàng)面愈合時

3、間。分別比較A、B、E組,C、D、E組的創(chuàng)面愈合率和愈合時間。聯(lián)合用藥實驗,在第3、7、14d取創(chuàng)面組織,分別用HE染色、免疫組織化學檢測血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)和基質(zhì)金屬蛋白酶-1(MMP-1),逆轉錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)檢測VEGF mRNA的表達變化規(guī)律,觀察不同時相點創(chuàng)面愈合情況。
　　 結果:①創(chuàng)面愈合時間。A組創(chuàng)面平均愈合時間為(13.57±0.40)d,在第7、10、14d創(chuàng)面愈合率與E組比較,差異具有

4、統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。C組創(chuàng)面平均愈合時間為(14.01±0.25)d,在第7、10、14d創(chuàng)面愈合率與E組比較差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。聯(lián)合用藥實驗中,F組創(chuàng)面平均愈合時間為(13.33±0.12)d,與I組比較差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。各個時相點,其創(chuàng)面愈合率與I組比較,差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。②HE染色。造模后第3、7d,F和H組創(chuàng)面成纖維細胞(FB)、毛細血管生成較G、I組豐富。第14d,F

5、組創(chuàng)面基本愈合,FB、毛細血管較其他對照組少;H組尚未完全愈合,其創(chuàng)面中FB增殖活躍,毛細血管數(shù)較多;G組組織學情況介于F、H組之間;各用藥組的愈合情況優(yōu)于I組。③MMP-1免疫組織化學。在造模后的第3d,各組已開始表達MMP-1,但無明顯差異(P＞0.05)。第7d,各組MMP-1含量均達峰值。與I組相比較,F組差異顯著具有統(tǒng)計學意義(P＜0.01),G、H組差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。第14d,各組MMP-1量下降,F、G組

6、顯著少于I組且差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。在各組之中,H組表達最多,但與I組相比不具統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。④VEGF免疫組織化學。造模后第3d,各組VEGF蛋白表達未見明顯差別(P＞0.05)。第7d,各組VEGF表達達高峰,與I組相比較,F組差異具有顯著統(tǒng)計學意義(P＜0.01),G、H組差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。第14d,各組VEGF下降。F組顯著少于I組,差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。G組少于I組,差

7、異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05),H組表達在各組中最多但與I組相比差異無統(tǒng)計學意義。④VEGF mRNA RT-PCR結果。第3d,各組mRNA表達未見明顯差異;第7d時,F、G組與I組比較差異具有顯著統(tǒng)計學意義(P＜0.01),H組差異具有統(tǒng)計學意義顯著(P＜0.05);第14d,各組表達均有下降,但F、G組與I組相比,差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05),H組表達在各組中最多但與I組相比差異無統(tǒng)計學意義。
　　 結論:①F組對