RhaFGF聯(lián)合rhEGF促進(jìn)兔耳全層皮膚缺損創(chuàng)面愈合的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:觀察重組人酸性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(rhaFGF)聯(lián)合重組人表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(rhEGF)對(duì)創(chuàng)面愈合的影響并探討其可能的機(jī)理。
　　 方法:①造模及分組:建立新西蘭大耳白兔兔耳全層皮膚缺損模型,先后進(jìn)行濃度梯度實(shí)驗(yàn)和聯(lián)合用藥實(shí)驗(yàn)。在濃度梯度實(shí)驗(yàn)中,建立兔耳全層皮膚缺損創(chuàng)面模型,隨機(jī)分為A組(rhaFGF60U/cm2)、B組(rhaFGF90U/cm2)、C組(rhEGF20U/cm2)、D組(rhEGF40U/cm2)和E

2、組(等量生理鹽水)共5組。根據(jù)濃度梯度實(shí)驗(yàn)結(jié)果設(shè)定聯(lián)合用藥實(shí)驗(yàn)試劑的濃度。聯(lián)合用藥實(shí)驗(yàn)建立模型同前,隨機(jī)分為F組(rhaFGF60U/cm2+rhEGF20U/cm2)、G組(rhaFGF60U/cm2)、H組(hbFGF60U/cm2)和I組(等量生理鹽水)共4組。②實(shí)驗(yàn)方法:造模后即開始用藥,每隔兩日按不同分組將試劑外用于創(chuàng)面。③實(shí)驗(yàn)評(píng)估:采用透明膜描記法記錄造模后第3、7、10、14d創(chuàng)面愈合面積,計(jì)算出創(chuàng)面愈合率,記錄創(chuàng)面愈合時(shí)

3、間。分別比較A、B、E組,C、D、E組的創(chuàng)面愈合率和愈合時(shí)間。聯(lián)合用藥實(shí)驗(yàn),在第3、7、14d取創(chuàng)面組織,分別用HE染色、免疫組織化學(xué)檢測(cè)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)和基質(zhì)金屬蛋白酶-1(MMP-1),逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測(cè)VEGF mRNA的表達(dá)變化規(guī)律,觀察不同時(shí)相點(diǎn)創(chuàng)面愈合情況。
　　 結(jié)果:①創(chuàng)面愈合時(shí)間。A組創(chuàng)面平均愈合時(shí)間為(13.57±0.40)d,在第7、10、14d創(chuàng)面愈合率與E組比較,差異具有

4、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。C組創(chuàng)面平均愈合時(shí)間為(14.01±0.25)d,在第7、10、14d創(chuàng)面愈合率與E組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。聯(lián)合用藥實(shí)驗(yàn)中,F組創(chuàng)面平均愈合時(shí)間為(13.33±0.12)d,與I組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。各個(gè)時(shí)相點(diǎn),其創(chuàng)面愈合率與I組比較,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。②HE染色。造模后第3、7d,F和H組創(chuàng)面成纖維細(xì)胞(FB)、毛細(xì)血管生成較G、I組豐富。第14d,F

5、組創(chuàng)面基本愈合,FB、毛細(xì)血管較其他對(duì)照組少;H組尚未完全愈合,其創(chuàng)面中FB增殖活躍,毛細(xì)血管數(shù)較多;G組組織學(xué)情況介于F、H組之間;各用藥組的愈合情況優(yōu)于I組。③MMP-1免疫組織化學(xué)。在造模后的第3d,各組已開始表達(dá)MMP-1,但無(wú)明顯差異(P＞0.05)。第7d,各組MMP-1含量均達(dá)峰值。與I組相比較,F組差異顯著具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01),G、H組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。第14d,各組MMP-1量下降,F、G組

6、顯著少于I組且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。在各組之中,H組表達(dá)最多,但與I組相比不具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。④VEGF免疫組織化學(xué)。造模后第3d,各組VEGF蛋白表達(dá)未見(jiàn)明顯差別(P＞0.05)。第7d,各組VEGF表達(dá)達(dá)高峰,與I組相比較,F組差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01),G、H組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。第14d,各組VEGF下降。F組顯著少于I組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。G組少于I組,差

7、異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),H組表達(dá)在各組中最多但與I組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。④VEGF mRNA RT-PCR結(jié)果。第3d,各組mRNA表達(dá)未見(jiàn)明顯差異;第7d時(shí),F、G組與I組比較差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01),H組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義顯著(P＜0.05);第14d,各組表達(dá)均有下降,但F、G組與I組相比,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),H組表達(dá)在各組中最多但與I組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)論:①F組對(duì)