巨噬細胞活化在糖尿病創(chuàng)面愈合中的作用及機制研究.pdf

1、目的：研究巨噬細胞活化的兩種亞型即經(jīng)典型活化的巨噬細胞(caM)和替代性活化的巨噬細胞(aaM)在糖尿病創(chuàng)面愈合中的作用并初步探討其機制。
　　方法：(1)STZ誘導成年雄性SD大鼠糖尿病模型背部制作全層缺損傷模型,用薄膜描繪法觀察糖尿病組和對照組的各時相點創(chuàng)面愈合速率差異;
　　(2)免疫組化觀察創(chuàng)面愈合時程中巨噬細胞數(shù)目的變化。免疫熒光雙標法證實創(chuàng)面組織中是否存在兩種活化類型的巨噬細胞及其陽性率;
　　(3)Wes

2、tern blot檢測糖尿病組和對照組創(chuàng)面愈合過程中cam和aaM的標記物的水平變化趨勢及兩組之間的差異程度;
　　(4)Real-time PCR定量檢測糖尿病組和對照組創(chuàng)面愈合過程中經(jīng)典型巨噬細胞活化和替代性巨噬細胞活化相應的上游Th1/Th2誘導因子水平變化趨勢及兩組之間的差異程度;
　　(5)ELISA檢測糖尿病組和對照組創(chuàng)面愈合過程中caM和aaM相應的炎癥狀態(tài)指標IL-10/IL-12比值的趨勢及兩組之間的差異程

3、度;
　　(6)將THP1刺激后與HUVEC共培養(yǎng),Western-blot觀察經(jīng)典型活化的巨噬細胞和替代性活化的巨噬細胞對HUVEC血管化的影響及高糖環(huán)境對巨噬細胞活化及HUVEC血管化的改變。
　　結(jié)果：(1)創(chuàng)面面積的動態(tài)觀察結(jié)果表明,相比糖尿病組,對照組的SD大鼠背部創(chuàng)面愈合較快;
　　(2)免疫組化表明糖尿病創(chuàng)面組織中巨噬細胞浸潤存在“慢進慢出”現(xiàn)象。激光共聚焦免疫熒光雙標法顯示正常創(chuàng)面愈合過程中caM主要集

4、中在炎癥期而aaM主要出現(xiàn)在修復增殖期。
　　(3)Western-blot表明糖尿病組和對照組創(chuàng)面愈合過程中caM和aaM的標記物(iNOS和Arg-1)的表達水平存在差異,其中糖尿病組中iNOS表達量在炎癥期較低而Arg-1表達量在后期明顯增高;
　　(4)Real-time PCR定量結(jié)果表明糖尿病組和對照組創(chuàng)面愈合過程中Th1/Th2誘導因子表達量與iNOS/Arg-1表達量有相關(guān)性;然而EUSA結(jié)果提示和體外實驗不