巨噬細(xì)胞活化在糖尿病創(chuàng)面愈合中的作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的：研究巨噬細(xì)胞活化的兩種亞型即經(jīng)典型活化的巨噬細(xì)胞(caM)和替代性活化的巨噬細(xì)胞(aaM)在糖尿病創(chuàng)面愈合中的作用并初步探討其機(jī)制。
　　方法：(1)STZ誘導(dǎo)成年雄性SD大鼠糖尿病模型背部制作全層缺損傷模型,用薄膜描繪法觀察糖尿病組和對(duì)照組的各時(shí)相點(diǎn)創(chuàng)面愈合速率差異;
　　(2)免疫組化觀察創(chuàng)面愈合時(shí)程中巨噬細(xì)胞數(shù)目的變化。免疫熒光雙標(biāo)法證實(shí)創(chuàng)面組織中是否存在兩種活化類型的巨噬細(xì)胞及其陽(yáng)性率;
　　(3)Wes

2、tern blot檢測(cè)糖尿病組和對(duì)照組創(chuàng)面愈合過(guò)程中cam和aaM的標(biāo)記物的水平變化趨勢(shì)及兩組之間的差異程度;
　　(4)Real-time PCR定量檢測(cè)糖尿病組和對(duì)照組創(chuàng)面愈合過(guò)程中經(jīng)典型巨噬細(xì)胞活化和替代性巨噬細(xì)胞活化相應(yīng)的上游Th1/Th2誘導(dǎo)因子水平變化趨勢(shì)及兩組之間的差異程度;
　　(5)ELISA檢測(cè)糖尿病組和對(duì)照組創(chuàng)面愈合過(guò)程中caM和aaM相應(yīng)的炎癥狀態(tài)指標(biāo)IL-10/IL-12比值的趨勢(shì)及兩組之間的差異程

3、度;
　　(6)將THP1刺激后與HUVEC共培養(yǎng),Western-blot觀察經(jīng)典型活化的巨噬細(xì)胞和替代性活化的巨噬細(xì)胞對(duì)HUVEC血管化的影響及高糖環(huán)境對(duì)巨噬細(xì)胞活化及HUVEC血管化的改變。
　　結(jié)果：(1)創(chuàng)面面積的動(dòng)態(tài)觀察結(jié)果表明,相比糖尿病組,對(duì)照組的SD大鼠背部創(chuàng)面愈合較快;
　　(2)免疫組化表明糖尿病創(chuàng)面組織中巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)存在“慢進(jìn)慢出”現(xiàn)象。激光共聚焦免疫熒光雙標(biāo)法顯示正常創(chuàng)面愈合過(guò)程中caM主要集

4、中在炎癥期而aaM主要出現(xiàn)在修復(fù)增殖期。
　　(3)Western-blot表明糖尿病組和對(duì)照組創(chuàng)面愈合過(guò)程中caM和aaM的標(biāo)記物(iNOS和Arg-1)的表達(dá)水平存在差異,其中糖尿病組中iNOS表達(dá)量在炎癥期較低而Arg-1表達(dá)量在后期明顯增高;
　　(4)Real-time PCR定量結(jié)果表明糖尿病組和對(duì)照組創(chuàng)面愈合過(guò)程中Th1/Th2誘導(dǎo)因子表達(dá)量與iNOS/Arg-1表達(dá)量有相關(guān)性;然而EUSA結(jié)果提示和體外實(shí)驗(yàn)不