IL-6-STAT3信號通路與肝硬變大鼠肝部分切除后肝再生的實驗研究.pdf

1、目的: 建立肝硬化大鼠肝部份切除模型,了解肝硬化大鼠與正常大鼠肝切除后肝再生過程的差異,探討IL-6/STAT3信號通路在肝硬變大鼠肝部分切除后肝再生障礙中的作用。
　　方法: 皮下注射50％四氯化碳橄欖油溶液+10%乙醇喂養(yǎng)的復(fù)合方法建立SPF級SD大鼠肝硬化模型,劑量為0.3ml/100g,時間為9周。正常大鼠為對照組。對照組及肝硬化組大鼠均切除肝臟中葉及左葉(約70%),分別于術(shù)后0h、1h、2h、4h、12h、24h、48

2、h及72h八個不同的時相點處死動物模型,收集并保存殘肝組織及血液標(biāo)本,離心血液收集血清后-80℃保存,肝組織一部分-80℃保存?zhèn)溆?另一部分福爾馬林固定后48小時內(nèi)行石蠟包埋。全自動生化分析儀測定大鼠血清ALT、AST、ALB以了解大鼠肝功能變化,Elisa法檢測血清IL-6及血清TNF-α濃度,免疫組化二步法檢測殘肝組織切片PCNA陽性細(xì)胞數(shù)及活性STAT3蛋白陽性細(xì)胞數(shù),常規(guī)病理切片光鏡觀察肝組織病理改變、有絲分裂細(xì)胞數(shù)。采用 SP

3、SS17.0和excel2003進行統(tǒng)計分析及做圖,數(shù)據(jù)采用均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差(x土s)方式記錄,組間差別比較采用t檢驗,P<0.05為有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果: 1、在模型制作過程中,對照組及實驗組共有5只死亡,其中實驗組死亡2只,造模成功率分別為94.1%及93.0%,光學(xué)顯微鏡下HE染色可見肝硬化大鼠正常肝小葉結(jié)構(gòu)被破壞,纖維組織廣泛增生,形成假小葉,假小葉內(nèi)肝細(xì)胞索排列紊亂,可見小葉中央靜脈缺如、偏位、或有2個以上;對照組大鼠肝

4、組織正常,肝小葉形態(tài)結(jié)構(gòu)規(guī)則;2、各時間段實驗組大鼠血清ALT、AST含量基本均高于對照組,而實驗組大鼠血清ALB均低于對照組,但伴隨肝再生過程的進展,肝功能均能逐漸恢復(fù);3、肝大部切除術(shù)后1-2d是肝臟增值最活躍階段,PCNA標(biāo)記細(xì)胞數(shù)及有絲分裂細(xì)胞數(shù)均于切除后12小時開始迅速升高,并于切除后48小時達峰值,然后逐漸下降,肝硬化組有絲分裂細(xì)胞數(shù)也于術(shù)后12小時開始升高,但術(shù)后24小時已達高峰并下降,肝硬化組 PCNA標(biāo)記細(xì)胞數(shù)在12小

5、時前均高于對照組,于切除后48小時達高峰后下降,其峰值遠低于對照組;4、肝切除后,對照組血清IL-6水平在術(shù)后1h達高峰,后緩慢下降;而實驗組則到術(shù)后12小時才緩慢到達高峰,之前均低于對照組,72h出現(xiàn)第二次高峰;肝切除后活性STAT3蛋白于2h達高峰后迅速下降至極低水平,但實驗組2h STAT3陽性細(xì)胞數(shù)明顯低于對照組。
　　結(jié)論: 1、肝部份切除后肝硬化組肝細(xì)胞再生能力遠低于對照組,肝硬化大鼠肝再生受抑制;2、肝硬化大鼠部分肝