軸突導(dǎo)向因子netrin-1在先天性巨結(jié)腸中表達(dá)分布及意義.pdf

1、目的：
　　 先天性巨結(jié)腸（Hirschsprung's disease，HD）是一種先天性疾病，發(fā)病率為1/5000，本病以腸道不同長(zhǎng)度的局部神經(jīng)節(jié)細(xì)胞缺失為主要病理特征。臨床上表現(xiàn)為功能性慢性腸梗阻，這是由于局部喪失正常的舒縮功能導(dǎo)致腸管不能將腸內(nèi)容物正常排出。目前的研究已經(jīng)證實(shí)先天性巨結(jié)腸是一種腸神經(jīng)系統(tǒng)（Entericnervous system，ENS）發(fā)育異常的疾病，是由于胚胎期神經(jīng)嵴干細(xì)胞沿腸壁遷移、分化過程及在腸

2、壁內(nèi)定位成熟出現(xiàn)障礙而導(dǎo)致的。
　　 腸神經(jīng)系統(tǒng)（ENS）是外周神經(jīng)系統(tǒng)的一部分，在很大程度上獨(dú)立于中樞神經(jīng)系統(tǒng)，又與其非常相似。負(fù)責(zé)協(xié)調(diào)腸道復(fù)雜的活動(dòng)方式。ENS可以監(jiān)測(cè)管腔和腸壁的狀態(tài)，做出適當(dāng)回應(yīng)，激活內(nèi)在反射，產(chǎn)生混合與推進(jìn)蠕動(dòng)運(yùn)動(dòng)和改變血液流量以及分泌水和電介質(zhì)。大多數(shù)的腸神經(jīng)神細(xì)胞來自起源于神經(jīng)管1-7體節(jié)的迷走神經(jīng)嵴干細(xì)胞，不同的迷走神經(jīng)嵴細(xì)胞分布到不同區(qū)域的腸管。一小部分前腸神經(jīng)細(xì)胞也是起源于后迷走區(qū)的前干神經(jīng)嵴

3、細(xì)胞。整個(gè)過程從胚胎第六周開始到第十二周時(shí)完成。
　　 Netrin-1是Netrins家族中的一個(gè)重要成員。Netrin-1作為神經(jīng)軸突導(dǎo)向因子既能定向誘導(dǎo)神經(jīng)軸突生長(zhǎng)，也在腸神經(jīng)嵴干細(xì)胞的遷移過程中發(fā)揮重要的作用。目前有關(guān)Netrin-1在腸神經(jīng)系統(tǒng)的研究集中在動(dòng)物的胚胎學(xué)方面，尚無有關(guān)Netrin-1在人類腸道表達(dá)、分布的報(bào)道。本研究的目的是觀察Netrin-1在HD患者正常段結(jié)腸和痙攣段結(jié)腸道中的分布、表達(dá)是否存在差異，

4、從而進(jìn)一步探討其在HD發(fā)病機(jī)制中所起的作用。
　　 方法：
　　 一、病例與標(biāo)本
　　 收集2008年1月-2009年10月本院病理科36例小兒先天性巨結(jié)腸石蠟標(biāo)本，其中男性32例、女性4例，年齡1月-5歲。其中長(zhǎng)段型5例，短段型例4例，常見型27例。這些患兒均為散發(fā)、無HD家族遺傳病史。
　　 二、實(shí)驗(yàn)試劑
　　 1、Netrin-1（H-104）：sc-20786多克隆抗體購自美國(guó)SANTA

5、CRUZ BIOTECHNOLOGY公司。
　　 2、SP試劑盒及DAB顯色劑購自北京中杉金橋有限公司。
　　 三、實(shí)驗(yàn)方法
　　 將36例HD患兒的正常段腸管與痙攣段腸管分為對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組，采用抗Netrin-1多克隆抗體免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)netrin-1在各組中的分布及表達(dá)。采用SSPS 13.0 for windows統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。將對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)組中腸壁肌層、粘膜層netrin-1的表達(dá)分別進(jìn)行

6、差異性檢驗(yàn)，檢驗(yàn)采用t檢驗(yàn)。
　　 結(jié)果：
　　 在對(duì)照組（正常段）腸管中肌層（縱肌、環(huán)肌）、肌間神經(jīng)節(jié)及粘膜層均見netrin-1表達(dá)，實(shí)驗(yàn)組（痙攣段）中肌層及粘膜層亦可見netrin-1表達(dá)，兩組間netrin-1的表達(dá)強(qiáng)度進(jìn)行差異性檢驗(yàn)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p>0.05）。
　　 結(jié)論：
　　 本研究Netrin-1在HD患兒正常段和痙攣段腸管的肌層、粘膜層表達(dá)在統(tǒng)計(jì)學(xué)上無顯著差異可能說明netrin