Exendin-4對(duì)抵抗素誘導(dǎo)的胰島βTc6細(xì)胞損害及PDX-1表達(dá)的干預(yù)作用.pdf

1、目的：1、研究抵抗素干預(yù)前后，胰島β細(xì)胞PDX-1 mRNA表達(dá)以及相應(yīng)的胰島素分泌功能、細(xì)胞形態(tài)和細(xì)胞增殖能力以及細(xì)胞凋亡情況的變化。
　　 2、應(yīng)用Exendin-4干預(yù)抵抗素介導(dǎo)的胰島β細(xì)胞損害，觀察Exendin-4干預(yù)后上述研究指標(biāo)的變化，探討Exendin-4對(duì)在相應(yīng)的抵抗素干預(yù)狀態(tài)下胰島β細(xì)胞的保護(hù)作用，分析可能的分子生物學(xué)機(jī)制。
　　 方法：
　　 1、體外培養(yǎng)βTc6細(xì)胞，不同濃度抵抗素(20

2、ng/ml、40 ng/ml、60 ng/ml、100 ng/ml、200 ng/ml)分別干預(yù)6、12、24小時(shí)，觀察細(xì)胞形態(tài)變化，CCK-8法檢測βTc6細(xì)胞的增殖能力， RT-PCR檢測PDX-1 mRNA表達(dá)的變化，放射免疫法檢測葡萄糖刺激的胰島素分泌，DNA Ladder法初步觀察細(xì)胞凋亡情況。
　　 2、應(yīng)用不同濃度Exendin-4(5 nmol/L、10 nmol/L、50 nmol/L)預(yù)孵育β Tc6細(xì)胞不同

3、時(shí)限(6小時(shí)、12小時(shí)、24小時(shí))，再予200 ng/ml濃度抵抗素干預(yù)24小時(shí)，觀察細(xì)胞形態(tài)，CCK-8法檢測βTc6細(xì)胞的增殖能力，RT-PCR檢測PDX-1mRNA表達(dá)的變化，放射免疫法檢測胰島素濃度，再予DNA Ladder法初步觀察細(xì)胞凋亡情況。
　　 結(jié)果：
　　 1、經(jīng)過60～200 ng/ml抵抗素干預(yù)6～24小時(shí)之后，細(xì)胞增殖活力降低，βTc6細(xì)胞形態(tài)學(xué)上呈現(xiàn)凋亡趨勢，葡萄糖刺激的胰島素分泌功能下降，而

4、20～40 ng/ml干預(yù)組的干預(yù)均未見此類現(xiàn)象。
　　 2、經(jīng)60～100 ng/ml抵抗素干預(yù)6小時(shí)，βTc6細(xì)胞PDX-1 mRNA的表達(dá)無明顯變化，但200 ng/ml抵抗素干預(yù)后PDX-1mRNA的表達(dá)已有下降。隨著干預(yù)時(shí)間進(jìn)一步延長，100～200 ng/ml抵抗素干預(yù)組PDX-1 mRNA的表達(dá)逐漸減少。60ng/ml抵抗素干預(yù)24小時(shí)βTc6細(xì)胞PDX-1 mRNA的表達(dá)亦低于空白對(duì)照組。而20 ng/ml和40

5、 ng/ml抵抗素干預(yù)組βTc6細(xì)胞PDX-1 mRNA的表達(dá)無明顯變化。
　　 3、20～200 ng/ml抵抗素干預(yù)6小時(shí)后，β Tc6細(xì)胞的DNA ladder無顯示凋亡跡象。但隨著時(shí)間延長至12小時(shí)，200 ng/ml抵抗素干預(yù)組即出現(xiàn)凋亡，而干預(yù)時(shí)間進(jìn)一步延長至24小時(shí)，100 ng/ml抵抗素干預(yù)組和200 ng/ml干預(yù)組同時(shí)出現(xiàn)了凋亡跡象。
　　 4、Exendin-4干預(yù)對(duì)抵抗素作用下βTc6細(xì)胞胰島素

6、分泌能力和增殖能力的影響：
　　 (1)5 nmol/L Exendin-46～12小時(shí)的預(yù)干預(yù)之后未見抵抗素作用下的βTc6細(xì)胞的胰島素分泌能力和增殖能力的改善。當(dāng)Exendin-4的干預(yù)時(shí)間延長至24小時(shí)，β Tc6細(xì)胞的胰島素分泌能力和增殖能力均有所提高。
　　 (2)當(dāng)Exendin-4的孵育濃度一定時(shí)(10～50 nmol/L)，Exendin-4在6小時(shí)、12小時(shí)、24小時(shí)均明顯改善β Tc6細(xì)胞的胰島素分泌

7、能力和增殖能力。
　　 (3)Exendin-4孵育濃度從10 nmol/L進(jìn)一步提高至50 nmol/L，尚未檢測到β Tc6細(xì)胞的胰島素分泌能力和增殖能力的進(jìn)一步改善。
　　 5、Exendin-4干預(yù)對(duì)抵抗素作用下βTc6細(xì)胞PDX-1mRNA表達(dá)的影響：
　　 (1)5 nmol/L～50 nmol/L Exendin-4預(yù)干預(yù)6小時(shí)尚不能上調(diào)抵抗素誘導(dǎo)的β Tc6細(xì)胞PDX-1 mRNA表達(dá)的下降。

8、r>　　 (2)將Exendin-4干預(yù)時(shí)間延長至12小時(shí)，在5 nmol/L和10 nmol/L Exendin-4作用下，βTc6細(xì)胞PDX-1 mRNA的表達(dá)逐漸升高，將Exendin-4濃度進(jìn)一步升高至50 nmol/L則未見PDX-1 mRNA表達(dá)的進(jìn)一步上調(diào)。
　　 (3)當(dāng)Exendin-4預(yù)干預(yù)時(shí)間為24小時(shí)，在5 nmol/L～50 nmol/L Exendin-4作用下，抵抗素作用下的β Tc6細(xì)胞PDX-

9、1 mRNA的表達(dá)明顯升高，并且各濃度Exendin-4組間無顯著差異。
　　 6、Exendin-4干預(yù)對(duì)抵抗素作用下β Tc6細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用：
　　 (1)5 nmol/L～50 nmol/L Exendin-4預(yù)干預(yù)6小時(shí)未見抗抵抗素誘導(dǎo)的β Tc6細(xì)胞凋亡明顯改善。
　　 (2)將Exendin-4干預(yù)時(shí)間延長至12小時(shí)，在5 nmol/L Exendin-4干預(yù)仍不能減少抵抗素誘導(dǎo)的βTc6細(xì)胞凋亡

10、，但10～50 nmol/L Exendin-4干預(yù)己可對(duì)抗抵抗素誘導(dǎo)的βTc6細(xì)胞凋亡。
　　 (3)當(dāng)Exendin-4干預(yù)時(shí)間調(diào)整為24小時(shí)，在5 nmol/L～50 nmol/L Exendin-4作用下，抵抗素作用下的βTc6細(xì)胞凋亡改善明顯。
　　 結(jié)論：
　　 1、短時(shí)間低濃度的抵抗素作用對(duì)β細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子PDX-1 mRNA的表達(dá)無影響，亦對(duì)β細(xì)胞的增殖活性和胰島素分泌能力以及凋亡無顯著影響。