γ-分泌酶抑制劑(DAPT)與Math1基因?qū)﹄x體培養(yǎng)大鼠耳蝸毛細胞發(fā)育的影響.pdf

1、福建醫(yī)科大學碩士學位論文γ-分泌酶抑制劑（DAPT）與Math1基因?qū)﹄x體培養(yǎng)大鼠耳蝸毛細胞發(fā)育的影響姓名：李麗賢申請學位級別：碩士專業(yè)：耳鼻咽喉科學指導(dǎo)教師：林昶;楊仕明20091001態(tài)結(jié)構(gòu)及排列方式隨著時間的改變逐漸發(fā)育成熟；P 1 4 耳蝸毛細胞各個部分已經(jīng)完全發(fā)育成熟，柱細胞頭板增寬，各細胞表面微絨毛減少，動纖毛從底圈至項圈逐漸退化已經(jīng)基本結(jié)束。離體培養(yǎng)7 天時，基底膜毛細胞生長狀況良好，以l排內(nèi)毛細胞和3 排外毛細胞排列，毛

2、細胞靜纖毛逐漸發(fā)育成熟；培養(yǎng)1 4 天時，大部分只剩1 排內(nèi)毛細胞和1 ．2 排外毛細胞，基底膜毛細胞形態(tài)很差，基本上發(fā)生融合、缺失，甚至皮板塌陷。結(jié)論：1 、在P 0 - P 1 4 這個時間段，大鼠耳蝸C o r t i 器由底圈到頂圈，內(nèi)毛細胞、外毛細胞及支持細胞由不成熟到成熟的逐漸發(fā)育過程。2 、體外培養(yǎng)7 天的基底膜總體生長狀態(tài)良好，內(nèi)外毛細胞及支持細胞逐漸發(fā)育成熟；培養(yǎng)1 4 天的基底膜生長狀態(tài)差，不同類型的細胞結(jié)構(gòu)均己破壞

3、。第二部分D A P T 與M a t h l 聯(lián)合應(yīng)用對離體培養(yǎng)C o r t i ' s 器毛細胞發(fā)育與再生的影響目的：研究將y 一分泌酶抑制劑( D A P T ) 和a d - M a t h l - E G F P 兩者聯(lián)合應(yīng)用，觀察是否比單獨應(yīng)用D A P T 或a d —M a t h l - E G F P 更能促進哺乳動物內(nèi)耳毛細胞的發(fā)育和分化。方法：取材和培養(yǎng)方法同第一部分，隨機分為正常培養(yǎng)組、D A P T

4、 組、a d ．m a t h l —E G F P 組、D A P T + a d ．m a t h l ．E G F P 組，按培養(yǎng)時間又分為4 天、7 天和9 天組。其中D A P T 為y ．分泌酶抑制劑，溶解于終濃度低于O ．1 ％的D M S O ，每日換液均加入D A P T ；a d ．m a t h l ．E G F P 組基底膜轉(zhuǎn)染a d ．m a t h l ．E G F P1 天，之后每天換液；D M 組為培養(yǎng)時

5、即加入D A P T ，在8 h 后轉(zhuǎn)染a d ．m a t h l ．E G F P1 天，之后換液同D A P T 組。采用免疫組織化學染色、掃描電鏡及半薄切片觀察基底膜毛細胞數(shù)量和組織形態(tài)學變化。結(jié)果：免疫組織化學染色及掃描電鏡：正常組頂圈呈1 排內(nèi)毛細胞，2 - 3排外毛細胞；中圈呈1 排內(nèi)毛細胞，3 排外毛細胞，內(nèi)外毛細胞排列規(guī)則，隨著培養(yǎng)天數(shù)的增加數(shù)量無明顯變化。D A P T 組及D M 組項圈呈1 排內(nèi)毛細胞，4 —8