Math1基因誘導成年大鼠前庭毛細胞再生的在體實驗研究.pdf

1、軍醫(yī)進修學院;解放軍總醫(yī)院博士學位論文Math1基因誘導成年大鼠前庭毛細胞再生的在體實驗研究姓名：徐金操申請學位級別：博士專業(yè)：耳鼻咽喉科學指導教師：黃德亮;楊仕明20090514軍醫(yī)進修學院博士學位論文一、新霉素對大鼠前庭毛細胞毒性作用的實驗研究目的：研究新霉素對大鼠前庭毛細胞的毒性作用，為藥物性前庭功能障礙動物模型的建立和相關研究提供參考。方法：將1 5 只成年W i s t a r 大鼠分為正常對照組、新霉素組和人工外淋巴液組，新

2、霉素組大鼠在右耳通過耳蝸底轉(zhuǎn)鼓階打孔的方法在耳蝸內(nèi)注入0 ．1 ％( ∥1 0 0 m 1 ) 新霉素5 u l ，人工外淋巴液組按同樣方法注入人工外淋巴液5 u l 。正常對照組大鼠不做任何處理。處理3 天后對動物進行頸髓硬膜外短聲誘發(fā)電位- ( c l i c k - e v o k e d p o t e n t i a l s O nt h es u r f a c eo ft h ec e r v i c a ld u r a

3、m a t e r , C D M ．C E P ) 檢查和游泳試驗，來評價前庭功能，然后將動物處死，進行組織形態(tài)學觀察。結果：3 天后新霉素組大鼠的前庭毛細胞即出現(xiàn)毀滅性破壞，并出現(xiàn)嚴重的前庭功能障礙。正常對照組大鼠的游泳時間為4 ．0 4 - 0 ．7 1 s ，新霉素組大鼠的游泳時間為1 0 ．2 4 - 1 ．6 4 s ，人工外淋巴液組大鼠的游泳時間為4 ．4 4 - 1 ．1 4 s 。在短聲( C l i c k ) 刺激

4、下，正常大鼠引出C D M ．C E P 的閾值為8 5 4 - 3 ．5 4d B ( S P L ) ，閾值時的潛伏期為6 ．5 9 ：t ：0 ．4 1 s ；新霉素組大鼠1 2 0 d B ( S P L ) 仍無法引出C D M ．C E P ；人工外淋巴液組大鼠引出C D M —C E P 的閾值為9 0 4 - 5 ．0 d B ( S P L ) ，閾值時的潛伏期為6 ．6 8 4 - 0 - 3 1 s 。結論：新霉素

5、對大鼠前庭毛細胞具有毀滅性的破壞作用，新霉素耳蝸內(nèi)注射的方法可以建立理想的前庭功能障礙動物模型。二、基因?qū)氪笫笄巴サ姆椒癆 d ．M a t h l 內(nèi)耳應用的安全性研究目的：探索前庭基因?qū)氲姆椒ê屯緩剑 d - M a t h l 的安全性進行研究，為前庭功能障礙基因治療的相關研究提供參考。方法：將2 5 只成年W i s m r大鼠分為正常對照組、缺失E l 、E 3 基因且構建有M a t h l 基因和綠色熒光蛋白報

6、告基因的復制缺陷型腺病毒( a d n o v i r u s ．M a t h l ．e n h a n c e d g r e e nf l u o r e s c e n c e p r o t e i n ，A d ．M a t h l 一E G F P ) 鼓階導入組和前庭階導入組。A d - M a t h l ．E G F P 導入組大鼠在右耳通過耳蝸底轉(zhuǎn)鼓階或前庭階打孔的方法導入物理滴度為2 ．I x1 0 1 1 V