裸鼠體內(nèi)高致瘤HL-60細(xì)胞模型的建立及其蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、目的：人腫瘤細(xì)胞的裸鼠致瘤性試驗(yàn)是腫瘤生物學(xué)研究的一項(xiàng)重要指標(biāo)，已經(jīng)廣泛的應(yīng)用于各種腫瘤的發(fā)病機(jī)制和治療研究。我們通過建立裸鼠高成瘤性的人急性粒細(xì)胞白血病細(xì)胞(HL-60)系，并運(yùn)用差異蛋白質(zhì)組學(xué)的方法，篩選并鑒定致瘤性不同的細(xì)胞系的差異表達(dá)蛋白質(zhì)，以期為白血病細(xì)胞裸鼠致瘤性發(fā)生和發(fā)展的分子機(jī)制提供思路。
　　 方法：采用體內(nèi)接種和體外傳代相結(jié)合的方法建立裸鼠成瘤率依次提高的HL-60細(xì)胞系，利用2D-DIGE技術(shù)對(duì)比HL-60

2、細(xì)胞系在裸鼠體內(nèi)連續(xù)4次致瘤后，隨著致瘤率依次提高的差異表達(dá)蛋白質(zhì)。應(yīng)用DeCyder6.5圖像分析軟件篩選野生型HL-60細(xì)胞和高致瘤HL60-4之間顯著上調(diào)或顯著下調(diào)的差異蛋白點(diǎn)，并用基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜(MALDI-TOF-MS)進(jìn)行基因表達(dá)產(chǎn)物鑒定，根據(jù)Swiss-Prot/UniProt庫(kù)的注釋信息對(duì)鑒定的蛋白質(zhì)進(jìn)行功能和細(xì)胞定位分析。
　　 結(jié)果：1.成功建立了裸鼠致瘤性逐漸增高的HL-60細(xì)胞系。野生型

3、HL-60初次接種，致瘤率30％；HL60-1第二次接種致瘤率50％；HL60-2第三次接種致瘤率80％；HL60-3第四次接種致瘤率100％；最后得到高致瘤性的HL60-4細(xì)胞。
　　 2.通過DIGE雙向電泳技術(shù)比較野生型HL-60細(xì)胞系和高致瘤HL60-4細(xì)胞之間的差異表達(dá)蛋白，篩選出87個(gè)差異蛋白點(diǎn)，經(jīng)過MALDI-TOF-MS分析，其中有64個(gè)蛋白點(diǎn)得到鑒定，對(duì)應(yīng)于24種基因表達(dá)產(chǎn)物。其中有10個(gè)蛋白質(zhì)在高致瘤HL60

4、-4細(xì)胞中顯著上調(diào)，13個(gè)蛋白質(zhì)在高致瘤HL60-4細(xì)胞顯著下調(diào)。對(duì)鑒定出來(lái)的蛋白進(jìn)行功能分類：包括核酸連接蛋白、細(xì)胞骨架、分子伴侶、轉(zhuǎn)錄因子、轉(zhuǎn)移酶、蛋白代謝和修飾、糖代謝、氨基酸代謝、免疫和防御功能等。尤為重要的發(fā)現(xiàn)是，核不均一核糖核蛋白H隨著裸鼠致瘤性的提高，依次在野生型HL-60，HL60-1、HL60-2、HL60-3、HL60-4細(xì)胞中出現(xiàn)上調(diào)變化趨勢(shì)；而谷胱甘肽硫-轉(zhuǎn)移酶π和烯醇化酶1出現(xiàn)下調(diào)變化趨勢(shì)。
　　 結(jié)論

5、：1.本實(shí)驗(yàn)通過體外傳代和裸鼠體內(nèi)接種4次后，建立了裸鼠致瘤率依次提高的細(xì)胞系，并應(yīng)用DIGE技術(shù)成功的制備了不同致瘤率的HL-60細(xì)胞系的差異表達(dá)的雙向凝膠，掌握了蛋白質(zhì)組學(xué)研究的基本方法。
　　 2.利用DIGE技術(shù)初步篩選、鑒定并分析了多個(gè)致瘤性相關(guān)的差異表達(dá)蛋白質(zhì)，其中蛋白質(zhì)hnRNP H、GSTπ，enolase1是HL-60細(xì)胞裸鼠致瘤率提高的最關(guān)鍵因素。隨著裸鼠致瘤率的提高，hnRNP H依次在各代細(xì)胞中表達(dá)上調(diào)，