軟組織透明細(xì)胞肉瘤融合基因及組織發(fā)生研究.pdf

1、目的：探討透明細(xì)胞肉瘤石蠟包埋組織中檢測(cè)EWS-ATF1融合基因的可行性及EWS-ATF1融合基因表達(dá)在透明細(xì)胞肉瘤診斷中的意義。通過(guò)TA克隆測(cè)序分析融合基因EWS-ATF1不同的融合位點(diǎn)與臨床預(yù)后之間的關(guān)系。并且，通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄酶聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)及免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)小眼畸形相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子(MITF)mRNA及MITF蛋白的表達(dá)來(lái)探討透明細(xì)胞肉瘤的組織發(fā)生與起源。 方法：收集確診為透明細(xì)胞肉瘤的26例福爾馬林固定石蠟包埋

2、組織標(biāo)本，5例組織庫(kù)保存的冰凍新鮮組織標(biāo)本，另外收集非透明細(xì)胞肉瘤標(biāo)本20例，均為石蠟包埋標(biāo)本，包括尤文氏肉瘤6例，原始神經(jīng)外胚層瘤5例，腺泡狀軟組織肉瘤2例，惡性黑色素瘤2例，滑膜肉瘤5例。所有標(biāo)本均有HE染色切片，全部經(jīng)2名以上病理專(zhuān)家復(fù)讀確診：過(guò)氧化物酶染色(SP)方法對(duì)26例透明細(xì)胞肉瘤石蠟組織標(biāo)本進(jìn)行免疫組化染色，檢測(cè)S-100、HMB-45蛋白的表達(dá)。選取其中24例石蠟組織標(biāo)本用SP方法檢測(cè)MITF蛋白的表達(dá)。5例冰凍組織標(biāo)

3、本進(jìn)行透射電鏡切片制作；從石蠟包埋組織及冰凍新鮮組織標(biāo)本中提取RNA，β-肌動(dòng)蛋白、β2-微球蛋白及GAPDH作為內(nèi)參照，用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)和巢式PCR檢測(cè)EWS-ATF1融合基因的表達(dá)；RT-PCR方法檢測(cè)5例冰凍組織標(biāo)本MITF基因mRNA的表達(dá)：對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行TA克隆測(cè)序；透射電鏡：5例冰凍透明細(xì)胞肉瘤標(biāo)本經(jīng)戊二醛固定，鋨酸后固定，脫水，環(huán)氧樹(shù)脂包埋，高溫聚合，作超薄切片，電鏡下觀察透明細(xì)胞肉瘤的超微結(jié)構(gòu)。

4、 結(jié)果：26例福爾馬林固定石蠟包埋組織標(biāo)本檢測(cè)到22例β-肌動(dòng)蛋白陽(yáng)性，24例β2微球蛋白陽(yáng)性，其中20例EWS-ATF1融合基因陽(yáng)性，16例為EWS-ATF1I型，4例為EWS-ATF1III型，余4例EWS-ATF1融合基因陰性。對(duì)照組均未檢測(cè)到EWS-ATF1融合基因的表達(dá)。26例透明細(xì)胞肉瘤石蠟組織標(biāo)本中S-100及HMB-45的總陽(yáng)性率分別為79.2％、70.8％；4例透明細(xì)胞肉瘤冰凍組織標(biāo)本可檢測(cè)到GAPDHmRNA表達(dá)

5、，余1例陰性；100％(4/4)檢測(cè)到MITFmRNA表達(dá)。所選取的24例CCS石蠟組織標(biāo)本中MITF總陽(yáng)性率為83.3％(20/24)；電鏡結(jié)果：大部分病例存在不同發(fā)育階段的黑色素小體，并可見(jiàn)數(shù)量不等的胞質(zhì)內(nèi)糖原、腫脹的線粒體和基底膜。 結(jié)論：在透明細(xì)胞肉瘤石蠟包埋組織中運(yùn)用RT-PCR檢測(cè)EWS—ATF1融合基因是可行的：融合基因EWS—ATF1的表達(dá)可作為除免疫組化外的—輔助診斷和鑒別診斷有力工具；透明細(xì)胞肉瘤中MITF在