苯妥英鈉中介的旁分泌作用對(duì)心肌梗死后組織修復(fù)的影響及相關(guān)表達(dá)譜芯片研究.pdf

1、心肌梗死后組織修復(fù)過(guò)程是影響心室重塑發(fā)展方向的決定因素。苯妥英鈉(Phenytoin，PHT)具有促進(jìn)結(jié)締組織增生的藥理特性，近年來(lái)的研究顯示，苯妥英鈉可誘導(dǎo)表皮成纖維細(xì)胞多種生長(zhǎng)因子及其受體表達(dá)上調(diào)，增強(qiáng)生長(zhǎng)因子的自分泌或旁分泌活性，即PHT中介的旁分泌作用。本實(shí)驗(yàn)室的前期工作證實(shí)苯妥英鈉可加速心肌梗死后組織修復(fù)，其可能機(jī)制是通過(guò)旁分泌作用，即促進(jìn)多種生長(zhǎng)因子的表達(dá)、抑制細(xì)胞凋亡、激活內(nèi)源性修復(fù)機(jī)制。然而，苯妥英鈉促進(jìn)心肌梗死后組織修

2、復(fù)的具體機(jī)制尚不十分清楚。 目的：采用Wistar大鼠心肌梗死模型，并在梗死后14天持續(xù)給予苯妥英鈉，觀察該干預(yù)因素對(duì)心肌梗死后組織修復(fù)過(guò)程的影響；高通量cDNA芯片技術(shù)觀察大鼠心肌梗死區(qū)不同時(shí)點(diǎn)基因表達(dá)譜的變化，旨在探討PHT介導(dǎo)的旁分泌機(jī)制對(duì)心肌梗死后組織修復(fù)和心室重塑的影響并探討其潛在的機(jī)制。 方法：6-8周雄性Wistar大鼠，結(jié)扎大鼠冠脈前降支建立急性心肌梗死模型。成活大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組(Sham組，n=10

3、)，對(duì)照組(MI組，n=26)，苯妥英鈉組(PHT組，n=18)。Sham組為只開胸不結(jié)扎，MI組為開胸結(jié)扎但不給予苯妥英鈉干預(yù)，PHT組以100mg/kg/day給予苯妥英鈉口服。分別于術(shù)后3天、7天和14天處死大鼠，經(jīng)冰PBS灌流后低溫凍存用以組織學(xué)分析。心肌組織橫斷面切片經(jīng)天狼猩紅染色后，采用苦味酸天狼猩紅-偏振光法對(duì)心肌梗死區(qū)膠原纖維沉積量、成熟程度的動(dòng)態(tài)變化進(jìn)行病理學(xué)分析。采用免疫熒光染色對(duì)梗死區(qū)新生小動(dòng)脈密度進(jìn)行病理學(xué)分析。

4、采用AffymetrixGeneChip()RatExpressionSet230系統(tǒng)比較大鼠MI組、PHT組分別在心梗后3天、7天基因表達(dá)的變化情況。 結(jié)果：心臟病理學(xué)分析：(1)心臟重量指標(biāo)比較：左室體重比(LVIBW)、脛骨長(zhǎng)度在各組間比較無(wú)顯著差異。(2)膠原容積分?jǐn)?shù)結(jié)果：與MI組比較，PHT組術(shù)后第3天、第7天和第14天梗死區(qū)CVF顯著增加；MI組及PHT組梗死區(qū)CVF皆隨時(shí)間而顯著增加；膠原成分比例結(jié)果：與MI組比較

5、，PHT組術(shù)后第3天、第7天和第14天梗死區(qū)膠原成熟度顯著增加；PHT組內(nèi)膠原成熟程度隨時(shí)間延長(zhǎng)而顯著增加。(3)免疫熒光分析結(jié)果：與MI組比較，PHT組小動(dòng)脈密度及毛細(xì)血管密度均顯著增加且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。梗死區(qū)表達(dá)譜芯片分析：術(shù)后3天MI組與術(shù)后7天MI組比較共有1165個(gè)基因表達(dá)發(fā)生變化，其中657個(gè)基因上調(diào)，508個(gè)基因下調(diào)；術(shù)后3天MI組與術(shù)后3天PHT組比較共有66個(gè)基因表達(dá)發(fā)生變化，其中33個(gè)基因上調(diào)，33個(gè)基因下調(diào)；術(shù)

6、后3天PHT組與術(shù)后7天PHT組比較共有81個(gè)基因表達(dá)發(fā)生變化，其中11個(gè)基因上調(diào)，70個(gè)基因下調(diào)；術(shù)后7天MI組與術(shù)后7天MI組比較共有個(gè)基因表達(dá)發(fā)生變化，其中17個(gè)上調(diào)，16個(gè)下調(diào)。PHT組與MI組相比發(fā)生變化的基因表達(dá)主要涉及到細(xì)胞周期、細(xì)胞外基質(zhì)受體、T細(xì)胞受體信號(hào)途徑、JAK-STAT信號(hào)途徑、MAPK信號(hào)途徑等。 結(jié)論：苯妥英鈉可改善心肌梗死后左室重塑，可能的機(jī)制是苯妥英鈉介導(dǎo)的旁分泌機(jī)制加速膠原沉積和成熟，促進(jìn)心肌