東亞飛蝗體內(nèi)痕量環(huán)腺苷酸的液相色譜分析.pdf

1、環(huán)腺苷酸(3'，5'-cAMP，adenosine3'，5'-cyclicmonophosphate)作為生物體內(nèi)普遍存在的第二信使不論在脊椎動(dòng)物還是無(wú)脊椎動(dòng)物中都發(fā)揮著重要的生理功能。建立快速靈敏的方法檢測(cè)cAMP在生物體內(nèi)的含量是一項(xiàng)非常有意義的研究。 實(shí)驗(yàn)建立了高效液相色譜—熒光檢測(cè)器和高效液相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用檢測(cè)東亞飛蝗中央神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)內(nèi)cAMP的含量的方法。cAMP用2-氯乙醛衍生化后會(huì)有較好的熒光響應(yīng)，用含有TB

2、AS的緩沖鹽和甲醇做流動(dòng)相，用高效液相色譜連接熒光檢測(cè)器檢測(cè)，方法的檢測(cè)限(LOD)可達(dá)到1fmol/ml，精密度實(shí)驗(yàn)的RSD為2.2％。cAMP添加回收率實(shí)驗(yàn)，在10pmol/ml添加濃度下的回收率為100.3±0.6％，在0.1pmol/ml添加濃度下的回收率為88.5％±2.6％，定量限(LOQ)約為0.01pmol/ml。這種非放射性的檢測(cè)方法適合檢測(cè)昆蟲(chóng)等小生物樣本體內(nèi)痕量cAMP的含量。高效液相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用檢測(cè)cAMP的方

3、法也得到了研究和發(fā)展。比較了離子阱質(zhì)譜正負(fù)離子和單級(jí)多級(jí)模式對(duì)檢測(cè)方法的影響，最后確定用DMHA作為離子對(duì)試劑，用離子阱質(zhì)譜的多級(jí)負(fù)離子模式檢測(cè)。 cAMP信號(hào)途徑在生物信號(hào)的跨膜傳輸過(guò)程中發(fā)揮著重要作用。東亞飛蝗中央神經(jīng)系統(tǒng)中含有章魚(yú)胺(OA)受體，章魚(yú)胺可以導(dǎo)致腺苷酸環(huán)化酶(ACE)活性增強(qiáng)從而使東亞飛蝗體內(nèi)cAMP含量增加。通過(guò)測(cè)定生成的cAMP含量可以篩選對(duì)章魚(yú)胺受體有活性的化合物作為新農(nóng)藥開(kāi)發(fā)的先導(dǎo)化合物。因?yàn)槿梭w不含

4、章魚(yú)胺受體，如果以章魚(yú)胺受體為靶標(biāo)開(kāi)發(fā)新農(nóng)藥，可能會(huì)研發(fā)出新一代低毒高效的農(nóng)藥。本文設(shè)計(jì)了離體條件下東亞飛蝗中央神經(jīng)系統(tǒng)中的腺苷酸環(huán)化酶反應(yīng)。實(shí)驗(yàn)用這種高效液相色譜的檢測(cè)方法測(cè)定了章魚(yú)胺刺激前后東亞飛蝗中央神經(jīng)系統(tǒng)中cAMP的含量的變化。不加OA刺激，蝗蟲(chóng)CNS中ACE反應(yīng)的cAMP基礎(chǔ)含量為0.417±0.009pmol/每只，用1mMOA刺激以后，cAMP的含量增加為1.505±0.003pmol/每只。實(shí)驗(yàn)為下一步開(kāi)發(fā)新型低毒高效