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文檔簡介
1、目的:從紅細(xì)胞變形性、紅細(xì)胞的膜流動性、紅細(xì)胞膜蛋白質(zhì)表達(dá)、紅細(xì)胞膜ATP酶活性及胞內(nèi)Na+和Ca2+濃度方面探討急性低氧對紅細(xì)胞的損傷以及低氧習(xí)服的保護(hù)作用。 方法:將健康雄性Wistar大鼠隨機(jī)分為常氧對照組、急性低氧組和低氧習(xí)服組,每組10只。采用低壓艙模擬高原低氧環(huán)境對大鼠分別進(jìn)行急性低氧和間斷低氧習(xí)服,麻醉后心臟采血,分別1.采用F.820全自動血細(xì)胞分析儀測定大鼠紅細(xì)胞血液學(xué)指標(biāo),采用LG-B.190血細(xì)胞變形測試儀
2、測定紅細(xì)胞變形性;2.采用日立?-4000熒光分光光度計(jì)檢測代表紅細(xì)胞膜脂流動性的DPH熒光偏振度,采用U-2001紫外分光光度計(jì)測定紅細(xì)胞膜膽固醇和總磷脂含量,采用薄層色譜分析法測定紅細(xì)胞膜磷脂成分PC、PS、·PE、SM的含量;3.采用雙向電泳建立大鼠紅細(xì)胞膜蛋白質(zhì)雙向電泳圖譜,通過ImageMaster2DElite軟件分析尋找出蛋白質(zhì)差異點(diǎn),對其進(jìn)行質(zhì)譜鑒定。4.采用紅細(xì)胞膜ATP酶活性測定試劑盒測定紅細(xì)胞膜ATP酶活性,采用紅
3、細(xì)胞內(nèi)Na+和Ca2+濃度測定試劑盒測定紅細(xì)胞內(nèi)Na+和Ca2+濃度。 結(jié)果:1.急性低氧大鼠紅細(xì)胞總數(shù)、血紅蛋白濃度增加,紅細(xì)胞變形性下降;紅細(xì)胞膜脂流動性下降,紅細(xì)胞膜膽固醇含量、總磷脂含量、膽固醇/總磷脂(C/P)比值下降,紅細(xì)胞膜磷脂各成分含量發(fā)生了變化;建立了急性低氧大鼠紅細(xì)胞膜蛋白質(zhì)雙向電泳圖譜,并與常氧大鼠紅細(xì)胞膜蛋白質(zhì)雙向電泳圖譜比較,選取7個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn),其中4個(gè)在急性低氧后表達(dá)下降,其余3個(gè)表達(dá)改變不明顯;紅細(xì)胞
4、Na+-K+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶活性下降,紅細(xì)胞內(nèi)Na+濃度和Ca2+濃度升高。2.低氧習(xí)服大鼠紅細(xì)胞總數(shù)、紅細(xì)胞比容、血紅蛋白濃度更高,紅細(xì)胞平均體積較急性低氧組和常氧對照組下降,紅細(xì)胞變形性比急性低氧組提高,接近常氧刈照組水平;紅細(xì)胞膜脂流動性增強(qiáng),紅細(xì)胞膜膽固醇含量、總磷脂含量、膽固醇/總磷脂(C/P)比值升高,紅細(xì)胞膜磷脂各成分含量發(fā)生了變化;建立了低氧習(xí)服大鼠紅細(xì)胞膜蛋白質(zhì)雙向電泳圖譜,并與急性低氧大鼠、常
5、氧大鼠紅細(xì)胞膜蛋白質(zhì)雙向電泳圖譜比較,上述7個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)中4個(gè)在低氧習(xí)服后表達(dá)增加,3個(gè)表達(dá)下降。蛋白質(zhì)差異點(diǎn)質(zhì)譜技術(shù)鑒定結(jié)果分別為是補(bǔ)體結(jié)合蛋白、水通道蛋白、膜攻擊復(fù)合物抑制因子、脂質(zhì)移行酶、葡萄糖運(yùn)載體、氨基磷脂轉(zhuǎn)移酶、依賴ATP的翻轉(zhuǎn)酶。其中脂質(zhì)移行酶、氨基磷脂轉(zhuǎn)移酶、依賴ATP的翻轉(zhuǎn)酶與紅細(xì)胞膜磷脂翻轉(zhuǎn)有關(guān);紅細(xì)胞膜Na+-K+-ATP酶和Ca2+.Mg2+_ATP酶明顯升高,紅細(xì)胞內(nèi)Na+濃度和Ca2+濃度降低。 結(jié)論:
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