高鐵環(huán)境對(duì)人成骨細(xì)胞功能的影響及鐵調(diào)素對(duì)人成骨細(xì)胞內(nèi)鈣離子的影響.pdf

1、本研究分為二部分：
　　 第一部分、高鐵環(huán)境對(duì)人成骨細(xì)胞功能的影響
　　 目的：探討高鐵環(huán)境（枸櫞酸鐵銨）對(duì)人成骨細(xì)胞(hFOB1.19)活性指標(biāo)（增殖、分化、礦化）及OPG/RANKL系統(tǒng)的影響。
　　 方法：人成骨細(xì)胞(hFOB1.19)培養(yǎng)后，用不同終濃度的枸櫞酸鐵銨(0umol/L、50umol/L、100umol/L、200umol/L)加入細(xì)胞培養(yǎng)基中，MTT法檢測(cè)成骨細(xì)胞增殖活性；堿性磷酸酶活性試劑

2、盒檢測(cè)堿性磷酸酶活性；Vonkossa染色法行鈣結(jié)節(jié)染色；用RT-PCR和Westernblot法分別檢測(cè)RANKL、OPG的基因和蛋白表達(dá)變化。
　　 結(jié)果：在FAC干預(yù)48h后,50umol/LFAC使成骨細(xì)胞增殖活性顯著下降(P＜0.05)，100umol/L和200umol/LFAC使成骨細(xì)胞增殖活性下降更為顯著(P＜0.01)；在FAC干預(yù)10d后，成骨細(xì)胞的堿性磷酸酶活性隨著干預(yù)濃度的增加而下降(P＜0.01)；在F

3、AC干預(yù)15d后，代表成骨細(xì)胞礦化能力的鈣結(jié)節(jié)顯著減少；在FAC干預(yù)48h后,50umol/LFAC對(duì)成骨細(xì)胞RANKL/OPGmRNA和蛋白表達(dá)之比無(wú)顯著影響(P＜0.05)，100umol/L和200umol/LFAC使成骨細(xì)胞RANKL/OPGmRNA和蛋白表達(dá)之比顯著增加(P＜0.01)。
　　 結(jié)論：高鐵環(huán)境不僅可以抑制成骨細(xì)胞增殖、分化和礦化，從而抑制骨形成；而且還可以促進(jìn)人成骨細(xì)胞RANKL/OPGmRNA和蛋白的

4、表達(dá)。因此，鐵過載在骨質(zhì)疏松癥的發(fā)病機(jī)制中，不僅直接抑制了成骨細(xì)胞的骨形成作用，而且間接促進(jìn)了破骨細(xì)胞的形成、活化，從而促進(jìn)骨吸收。
　　 第二部分、鐵調(diào)素對(duì)人成骨細(xì)胞內(nèi)鈣離子的影響
　　 目的：研究鐵調(diào)素在正常和不同濃度高鐵環(huán)境下對(duì)成骨細(xì)胞內(nèi)鈣離子的影響，并探討其中的作用機(jī)制。
　　 方法：人成骨細(xì)胞株(hFOB1.19)分別在正常和不同濃度高鐵環(huán)境(10、200umol/L)下培養(yǎng)，然后用不同終濃度鐵調(diào)素干預(yù)

5、24h，細(xì)胞經(jīng)鈣離子熒光劑(fluo-3/AM)染色后用流式細(xì)胞儀檢測(cè)成骨細(xì)胞內(nèi)鈣離子熒光強(qiáng)度。此外，在正常環(huán)境下，分別用10umol/L的丹曲林和20umol/L的尼莫地平預(yù)處理人成骨細(xì)胞25min和10min，然后觀察鐵調(diào)素100nmol/L干預(yù)24h后對(duì)人成骨細(xì)胞內(nèi)鈣離子的影響。
　　 結(jié)果：在正常環(huán)境下，鐵調(diào)素10nmol/L時(shí)成骨細(xì)胞內(nèi)鈣離子熒光無(wú)顯著變化(P＞0.05),30nmol/L時(shí)成骨細(xì)胞內(nèi)鈣離子熒光開始增加

6、(P＜0.05)，100nmol/L時(shí)顯著增加(P＜0.01),300nmol/L時(shí)無(wú)顯著變化(P＞0.05)；在10umol/L高鐵環(huán)境下，鐵調(diào)素的作用與其在正常環(huán)境下相似，只是30nmol/L時(shí)成骨細(xì)胞內(nèi)鈣離子增加較正常環(huán)境下更為顯著(P＜0.01)；在200umol/L高鐵環(huán)境下，鐵調(diào)素在10nmol/L至100nmol/L范圍之間使成骨細(xì)胞內(nèi)鈣離子熒光強(qiáng)度均顯著增加(P＜0.01),300nmol/L時(shí)無(wú)變化。此外，當(dāng)人成骨細(xì)胞