輻射損傷成骨細胞的Ⅰ型膠原表達變化和對破骨細胞功能的影響.pdf

1、大量研究表明骨組織對輻射作用非常敏感，輻射可造成骨損傷。本實驗從基因和蛋白水平研究了輻射對成骨細胞(osteoblasts，OB)的影響及輻射后的成骨細胞對破骨細胞(osteoclasts，OC)的影響。
　　 本實驗首先研究了成骨細胞輻射后Ⅰ型膠原蛋白的變化。實驗的第一步是抽取小鼠骨髓，然后將骨髓基質(zhì)細胞在體外誘導(dǎo)成成骨細胞，進而對其特性進行分析，例如觀察細胞形態(tài)特征、堿性磷酸酶染色等。結(jié)果表明骨髓基質(zhì)細胞在誘導(dǎo)培養(yǎng)基的作用下

2、，分化成了成骨細胞。根據(jù)培養(yǎng)階段的不同，成骨細胞分為早期成骨細胞和晚期成骨細胞。分別提取RNA，進行逆轉(zhuǎn)錄，用RT-PCR方法分析了1-4Gy照射的早期和晚期成骨細胞的Collagen typeⅠ表達。揭示輻射對于成骨細胞分泌Collagen typeⅠ能力的影響。
　　 實驗結(jié)果表明，與對照組相比，1-3Gy劑量照射后的早期成骨細胞Collagen typeⅠ的表達增強（P＜0.05），但培養(yǎng)10d后的晚期成骨細胞Collag

3、en typeⅠ的表達降低；在4Gy劑量照射下，晚期成骨細胞Collagen typeⅠ的表達明顯高于早期成骨細胞的表達(P＜0.01)?？傊?-3Gy輻射后．早期成骨細胞Collagen typeⅠ的表達增強，成骨能力增強；晚期成骨細胞Collagen typeⅠ的表達降低，成骨能力減弱。而4Gy輻射后，晚期成骨細胞Collagen typeⅠ的表達增強，有可能是其代償功能表現(xiàn)。
　　 同時，探索了輻射損傷的成骨細胞對破骨

4、細胞生長和功能的影響。在正常生理情況下，骨重建的更新過程依賴于破骨細胞和成骨細胞的相互制約，使骨吸收與骨形成處于平衡狀態(tài)。破骨細胞、成骨細胞之間功能和數(shù)量的失調(diào)將導(dǎo)致骨骼形態(tài)結(jié)構(gòu)的異常。我們初步觀察了輻射損傷的成骨細胞對破骨細胞功能的調(diào)節(jié)。
　　 本研究采用小鼠巨噬細胞系（RAW264.7）模擬破骨前體細胞，輻射后的成骨細胞上清對RAW264.7細胞進行培養(yǎng)，分析RAW264.7細胞克隆，判定其增值能力。應(yīng)用實時定量聚合酶鏈反應(yīng)

5、(Real-time polymerase chain reaction，Real-time PCR)方法，檢測RAW264.7細胞的抗酒石酸酸性磷酸酶（tartrate-resistant acid phosphatase，TRAP）、核因子-кB受體活化因子（Receptor activator of nuclear Factor-кB．RANK）、及Notch-2通路中相關(guān)因子表達的變化情況。
　　 結(jié)果：顯示，經(jīng)過照射損

6、傷的成骨細胞所提取的上清液培養(yǎng)RAW264.7細胞生長克隆數(shù)隨著成骨細胞受照射劑量的增加而減少；與對照組相比，RANK、TRAP基因及Notch-2信號相關(guān)分子的表達也明顯降低(p＜0.01)。因此我們推測照射后的成骨細胞的上清液通過幾種信號途徑對破骨前體細胞RAW264.7的增值和分化起抑制作用。
　　 總之，本研究有助于我們了解輻射后的成骨細胞是如何對破骨細胞進行調(diào)節(jié)的。使我們進一步認識，骨形成和骨吸收在骨的更新和改建中過程