腺相關(guān)病毒介導(dǎo)血管抑素(rAAV-AS)對(duì)糖尿病大鼠腎組織TGF-β1和VEGF表達(dá)的影響.pdf

1、目的:（1）尾靜脈注射腺相關(guān)病毒介導(dǎo)血管抑素(adeno-associated virus- angiostatin ,rAAV-AS)，檢測(cè)rAAV-AS 在糖尿病腎病大鼠腎臟是否能夠穩(wěn)定表達(dá)，探討rAAV-AS對(duì)糖尿病腎病大鼠腎臟的作用；
　　 （2）觀察糖尿病腎病大鼠腎組織中轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1（Transforming growth factor-β1,TGF-β1）和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(Vessel endothelium

2、 growth factor ,VEGF)的表達(dá)，探討腺相關(guān)病毒介導(dǎo)血管抑素對(duì)糖尿病大鼠腎組織TGF-β1和VEGF表達(dá)的影響。
　　 方法: 清潔級(jí)SD(Sprague- Dawley)雄性大鼠隨機(jī)分為正常組（NC組，n=10），其余大鼠使用鏈脲佐菌素（streptozotocin ,STZ）60mg/kg腹腔注射誘導(dǎo)糖尿病模型，分為糖尿病腎病組（DN組, n=10），腺相關(guān)病毒空載體組（rAAV-0, n=10）,腺相關(guān)病毒

3、介導(dǎo)血管抑素組（rAAV-AS，n=30），包括：腺相關(guān)病毒介導(dǎo)血管抑素低劑量治療組（AS1, n=10, 1 ×1012VG /kg BW），腺相關(guān)病毒介導(dǎo)血管抑素中劑量治療組（AS2, n=10, 2 ×1012VG /kg BW），腺相關(guān)病毒介導(dǎo)血管抑素高劑量治療組（AS3, n=10, 4 ×1012VG /kg BW）；尾靜脈注射給藥,8周末免疫印跡法檢測(cè)腎組織中血管抑素的表達(dá)，檢測(cè)各組大鼠的腎指數(shù)（kidney index,

4、 KI）及生化指標(biāo)變化，光鏡觀察大鼠腎組織結(jié)構(gòu)，免疫組化法檢測(cè)腎組織中轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子（TGF-β1）、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）的表達(dá)變化。
　　 結(jié)果:（1）STZ誘導(dǎo)糖尿病造模的成功率為90 ％；
　　 （2）免疫印跡法結(jié)果：DN組基本不表達(dá)AS，給予rAAV-AS治療后，大鼠腎組織中AS表達(dá)明顯增多，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P < 0.05)；
　　 （3）DN組的KI、MAU、BUN、Scr 、Glu、HbA1

5、c明顯增高，給予中劑量和高劑量rAAV-AS治療后，MAU、BUN、Scr明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05 ）；
　　 （4）腎組織病理學(xué)變化：DN組腎小球細(xì)胞數(shù)顯著增多，毛細(xì)血管袢塌陷,管腔閉塞,腎小球體積增大,淋巴細(xì)胞數(shù)量增多；腎小管尤其是近曲小管腫脹、變性、空泡形成,腎間質(zhì)可見大量淋巴細(xì)胞和單核巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)。給予中劑量和高劑量rAAV-AS治療后，病變明顯減輕；（5）免疫組化結(jié)果：DN組的TGF-β1和VEGF

6、表達(dá)明顯增多，給予中劑量和高劑量rAAV-AS治療后，TGF-β1和VEGF表達(dá)減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05 ）。
　　 結(jié)論:
　　 （1）腺相關(guān)病毒介導(dǎo)血管抑素可以在腎組織中持續(xù)較高水平的表達(dá)；
　　 （2）尾靜脈注射一定劑量（大于2 ×1012VG /kg BW）的腺相關(guān)病毒介導(dǎo)血管抑素對(duì)大鼠糖尿病腎病具有保護(hù)作用，且這種保護(hù)作用不依賴于血糖的降低；
　　 （3）腺相關(guān)病毒介導(dǎo)血管抑素可