羅格列酮抗動脈粥樣硬化的機(jī)制研究及2型糖尿病患者單核細(xì)胞ABCA1變化的分析.pdf

1、動脈粥樣硬化性心血管疾病是全世界發(fā)病及死亡的主要原因。流行病學(xué)和臨床研究表明，血漿高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)和其主要成分載脂蛋白A1(apoA-1)與動脈粥樣硬化性心血管病的危險性呈負(fù)相關(guān)，其主要機(jī)制可能是HDL-C和apoA-1促進(jìn)外周細(xì)胞蓄積的膽固醇向肝臟的逆轉(zhuǎn)運(yùn)，并最終通過膽汁、糞便排出體外，即膽固醇逆轉(zhuǎn)運(yùn)(RCT)。RCT包括許多環(huán)節(jié)，其中ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)子A1(ABCA1)介導(dǎo)的巨噬細(xì)胞內(nèi)膽固醇的流出和HDL-C的形成是

2、其始動環(huán)節(jié)。因此ABCA1與HDL-C水平及動脈粥樣硬化(AS)密切相關(guān)。上調(diào)ABCA1表達(dá)顯著增加血漿HDL-C水平，同時抑制AS的進(jìn)展，相反，ABCA1基因的變異或缺失可以使HDL-C水平接近于零，同時促進(jìn)AS，這些顯示ABCA1促進(jìn)RCT。 近年來研究發(fā)現(xiàn)羅格列酮作為PPARγ激動劑，不論是在糖尿病狀態(tài)還是在非糖尿病狀態(tài)均可抑制AS的進(jìn)展，其中一個重要途徑是增加細(xì)胞ABCA1的表達(dá)，由此可以推測，羅格列酮可以通過上調(diào)ABC

3、A1表達(dá)促進(jìn)RCT最終發(fā)揮抗AS作用，但是這些觀點(diǎn)一直沒有被證明。因此在本研究中，我們以外周巨噬細(xì)胞、脂肪細(xì)胞及中心肝細(xì)胞對[3H]膽固醇的轉(zhuǎn)出率間接反映RCT水平，以流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞表面ABCA1表達(dá)，分析巨噬細(xì)胞、肝細(xì)胞及脂肪細(xì)胞ABCA1在兔AS形成過程對RCT的作用并探討羅格列酮抗AS的新機(jī)制。 2型糖尿病患者出現(xiàn)的動脈粥樣硬化性心血管合并癥被越來越多的學(xué)者及臨床工作者所重視，以慢性高血糖為特征的脂質(zhì)代謝紊亂可能是2型

4、糖尿病患者易發(fā)AS的一個重要因素。ABCA1與脂質(zhì)代謝密切相關(guān)，其阻止動脈粥樣AS進(jìn)展的作用已經(jīng)被證實(shí)，但目前國內(nèi)外對2型糖尿病狀態(tài)下ABCA1的變化卻知之甚少，因此對ABCA1的變化分析將為2型糖尿病患者易發(fā)AS的機(jī)制研究提供一個新的方向。 研究目的： 我們以兔動脈粥樣硬化(AS)模型為研究對象，分析單核/巨噬細(xì)胞、脂肪細(xì)胞及肝細(xì)胞ABCA1在動脈粥樣硬化(AS)形成過程中對RCT的作用，同時探討及證明羅格列酮抗AS的

5、新機(jī)制；我們同時在臨床上對2型糖尿病患者外周單核細(xì)胞ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)子A1的變化進(jìn)行分析，以發(fā)現(xiàn)2型糖尿病狀態(tài)下ABCA1的變化及意義。 方法： 基礎(chǔ)研究方面：我們用24只新西蘭白兔隨機(jī)分為4組：(1)對照組：單純喂食高膽固醇飲食；(2)羅格列酮組：在單純高膽固醇飲食的基礎(chǔ)上，予以灌服羅格列酮2mg/d；(3)羅格列酮+辛伐他汀組：在單純高膽固醇飲食的基礎(chǔ)上，予以灌服羅格列酮2mg/d，辛伐他汀10mg/d。(4)格列本

6、脲組：在單純高膽固醇飲食的基礎(chǔ)上，予以灌服格列苯脲2.5mg/d。利用流式細(xì)胞術(shù)檢測外周單核細(xì)胞、腹腔巨噬細(xì)胞、脂肪細(xì)胞和肝細(xì)胞ABCA1的表達(dá)量，利用液閃計數(shù)儀檢測腹腔巨噬細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、肝細(xì)胞對[3H]膽固醇轉(zhuǎn)出率，利用酶法測定兔的血脂以及主動脈、脂肪、肝臟組織的膽固醇含量，并利用專業(yè)圖像分析軟件分析主動脈粥樣硬化斑塊的面積，最后進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。 臨床研究方面：我們分別抽取2型糖尿病和正常對照兩組人群(每組40例。2型糖尿病

7、組，男21例，女19例，年齡52.2±10.4歲，就診于南方醫(yī)院內(nèi)分泌科，2型糖尿病診斷明確但未正規(guī)服用降脂藥物治療的患者；正常組，男22例，女18例，年齡49.8±12.5歲，就診于南方醫(yī)科大學(xué)附屬南方醫(yī)院脊柱骨科非高脂血癥患者，以上兩組均排除高血壓、冠心病、嚴(yán)重肝腎功能障礙、腫瘤等疾病，年齡、性別無顯著差異。)靜脈血2ml，提取外周血單核細(xì)胞并利用流式細(xì)胞術(shù)分析氧化修飾的低密度脂蛋白(Ox-LDL)刺激前后ATP結(jié)合核轉(zhuǎn)運(yùn)子A1的表

8、達(dá)變化，同時檢測兩組人群的血脂水平和2型糖尿病組人群空腹血糖及糖化血紅蛋白含量，并對2型糖尿病患者單核細(xì)胞ABCA1表達(dá)與年齡、血脂、糖代謝的關(guān)系進(jìn)行了研究。 結(jié)果： 1.基礎(chǔ)研究 1)4組動物間血漿HDL-C、apoA1、NHDL-C水平及體重基線無明顯差異，6周后所有動物均成功復(fù)制動脈粥樣硬化模型，且4組動物間體重?zé)o明顯改變。 2)6周時，與對照組相比，羅格列酮組外周單核細(xì)胞、腹腔巨噬細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、

9、肝細(xì)胞ABCA1的表達(dá)，血漿HDL-C、apoA1水平及腹腔巨噬細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、肝細(xì)胞對[3H]膽固醇的轉(zhuǎn)出率明顯升高；NHDL-C水平無明顯變化；肝臟、脂肪、主動脈的膽固醇含量以及主動脈AS面積明顯減小。 3)6周時，羅格列酮+辛伐他汀組出現(xiàn)類似羅格列酮組的變化，但不同的是，羅格列酮+辛伐他汀組血漿NHDL-C水平較對照組明顯下降，并且與羅格列酮組相比，羅格列酮+辛伐他汀組外周單核細(xì)胞、腹腔巨噬細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、肝細(xì)胞ABCA1

10、的表達(dá)，血漿HDL-C、apoA1水平以及腹腔巨噬細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、肝細(xì)胞對[3H]膽固醇的轉(zhuǎn)出率均增加得更加明顯，同時肝臟、脂肪、主動脈的膽固醇含量和主動脈AS面積則更加明顯的減少。 4)6周時，與對照組相比，格列苯脲組外周單核細(xì)胞、腹腔巨噬細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、肝細(xì)胞ABCA1的表達(dá)，血漿HDL-C、apoA1水平及腹腔巨噬細(xì)胞(p=0.006)、脂肪細(xì)胞、肝細(xì)胞對[3H]膽固醇的轉(zhuǎn)出率明顯降低；NHDL-C水平無明顯變化；肝臟、脂

11、肪、主動脈的膽固醇含量以及主動脈AS面積明顯增大。 5)綜合4組動物分析，主動脈組織、脂肪組織、肝組織的膽固醇含量均分別與腹腔巨噬細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、肝細(xì)胞對[3H]膽固醇的轉(zhuǎn)出率呈負(fù)相關(guān)；腹腔巨噬細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、肝細(xì)胞的ABCA1表達(dá)量分別與其對[3H]膽固醇的轉(zhuǎn)出率呈正相關(guān)；單核細(xì)胞ABCA1的表達(dá)量分別與腹腔巨噬細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、肝細(xì)胞對[3H]膽固醇的轉(zhuǎn)出率呈正相關(guān)。 2.臨床研究 1)與對照組相比，2型糖尿病

12、組AS的危險因素TG、NHDL-C水平顯著升高，抗AS的因素HDL-C、apoA-1的水平顯著降低。 2)與對照組相比，2型糖尿病組外周單核細(xì)胞ABCA1的表達(dá)顯著降低，經(jīng)Ox-LDL刺激24h后ABCA1的改變量(刺激后表達(dá)量/初始表達(dá)量)明顯增大，但最終表達(dá)量仍顯著小于對照組。 3)2型糖尿病組ABCA1的表達(dá)變化與年齡、空腹血糖(FPG)和糖化血紅蛋白(HbA1C)無明顯相關(guān)性，但2型糖尿病組ABCA1的改變量與血