基于生物芯片的高通量DNA甲基化檢測(cè)方法的研究.pdf

1、東南大學(xué)碩士學(xué)位論文基于生物芯片的高通量DNA甲基化檢測(cè)方法的研究姓名：武志祥申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：生物醫(yī)學(xué)工程指導(dǎo)教師：陸祖宏20080407中文摘要物芯片的優(yōu)勢(shì)引入到MSMLPA中，探討一種基于生物芯片的MsMLPA。針對(duì)被檢測(cè)的甲基化DNA，設(shè)計(jì)和合成了兩個(gè)寡核苷酸部分，其中一個(gè)部分含有一個(gè)大約20bp左右的密碼區(qū)(Tag區(qū))，可與通用芯片上特定序列的寡核苷酸探針互補(bǔ)雜交。探針的兩個(gè)寡核苷酸雜交序列均與目標(biāo)序列互補(bǔ)，其末端都連有

2、相同的PCR引物。且要求設(shè)計(jì)的MSMLPA的探針要有甲基化敏感的限制性內(nèi)切酶BstUI(CG￡G)的識(shí)別位點(diǎn)。經(jīng)探針和目標(biāo)序列雜交后，降低反應(yīng)體系溫度，并向其中加入連接酶和BstUI，若原樣本DNA中含有BstUI識(shí)別的非甲基化的位點(diǎn)，則非甲基化探針的兩個(gè)寡核苷酸部分不能連接，而甲基化的探針順利連接不被切割，在隨后的PCR反應(yīng)中只有兩個(gè)寡核苷酸部分連接后的探針才能被擴(kuò)增。最后通過芯片分析擴(kuò)增片段，確定待研究位點(diǎn)的甲基化情況。在這項(xiàng)技術(shù)中