DNA甲基化及其檢測方法研究.pdf

1、該研究中,我們首先將巢式甲基化特異性PCR(nMSP)用于甲基化檢測,并檢測了不同類型標(biāo)本中p16基因的過甲基化,與普通的MSP法相比,nMSP法檢測的靈敏度、特異性顯著提高.同時(shí),我們還建立了一種基于錯配雜交、增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光檢測的甲基化定量檢測方法,并應(yīng)用新的甲基化定量方法檢測了非小細(xì)胞肺癌患者的外周血血清中p16基因的甲基化狀態(tài),探討了p16基因的異常甲基化在腫瘤的早期診斷中的應(yīng)用.學(xué)位論文共分四部分:一.巢式甲基化特異性PCR(nM

2、SP)檢測不同類型標(biāo)本中p16基因的過甲基化利用巢式甲基化特異性PCR(nMSP)檢測了腫瘤患者血清、腫瘤組織及石蠟包埋組織中p16基因的甲基化狀態(tài).nMSP法采用兩步擴(kuò)增,顯著提高了檢測的靈敏度、特異性.二.建立一種基于錯配雜交、增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光的甲基化定量檢測方法該文建立了一種基于錯配雜交和化學(xué)發(fā)光的p16基因啟動子區(qū)過甲基化的定量檢測方法.三.腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄失活與p16基因的過甲基化關(guān)系研究p16基因的轉(zhuǎn)錄失活與它的啟動子過甲基化之間

3、存在非常密切的聯(lián)系,為了研究p16基因過甲基化對轉(zhuǎn)錄的抑制作用,我們分別用nMSP法以及新建立的甲基化定量檢測方法分析了四株腫瘤細(xì)胞(人移行膀胱癌細(xì)胞株T-24、人肺腺癌細(xì)胞株SPC-A1、人移行膀胱癌細(xì)胞株BIU-87、人肝母細(xì)胞瘤細(xì)胞株Hep-G2)在用脫甲基化試劑5-氮胞苷(5-Aza-CdR)處理前后p16基因的甲基化程度的改變,并且同時(shí)用RT-PCR方法檢測了處理前后p16基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)水平.結(jié)果顯示處理前后,除人移行膀胱癌細(xì)