基于生物芯片的結(jié)直腸癌相關(guān)基因DNA甲基化研究.pdf

1、在腫瘤的發(fā)生和發(fā)展中存在著DNA甲基化水平和模式的紊亂，DNA甲基化異?？赏ㄟ^(guò)影響染色質(zhì)結(jié)構(gòu)以及癌基因和抑癌基因的表達(dá)而參與腫瘤的形成。DNA甲基化檢測(cè)已應(yīng)用在腫瘤的早期診斷，腫瘤分型，預(yù)后分析，抗癌藥物篩選等方面。但目前現(xiàn)有的甲基化檢測(cè)方法在檢測(cè)的位點(diǎn)、檢測(cè)的基因以及檢測(cè)的樣本上存在著通量不高的缺點(diǎn)。為此，我們發(fā)展了幾種新的甲基化檢測(cè)芯片，并成功應(yīng)用于結(jié)直腸癌相關(guān)基因的甲基化模式、甲基化密度、預(yù)后分析以及多基因甲基化檢測(cè)等方面。

2、 1．結(jié)直腸癌手術(shù)切緣甲基化模式分析手術(shù)切緣陽(yáng)性被認(rèn)為是腫瘤局部復(fù)發(fā)的主要原因。但是即使在手術(shù)切緣陰性的病人中，仍存在較高的復(fù)發(fā)率。所以有必要發(fā)展比傳統(tǒng)的組織病理學(xué)檢查更為敏感的分子技術(shù)。methylation-specific PCR(MSP)是一種非常敏感的檢測(cè)DNA甲基化的分子技術(shù)。它已成功地運(yùn)用于肺癌，頭頸癌、肝癌等的手術(shù)切緣的甲基化模式的研究。但此種方法只能檢測(cè)位于引物區(qū)的幾個(gè)CG位點(diǎn)，獲得的信息量太少。所以我們發(fā)展了一種新

3、的分析甲基化模式的寡核苷酸芯片。通過(guò)固定甲基化特異的探針，與Cy3標(biāo)記的不同比例的hMLH1基因全甲基化與非甲基化標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行雜交，構(gòu)建了定量的標(biāo)準(zhǔn)曲線。通過(guò)分析20例結(jié)直腸癌樣本，我們發(fā)現(xiàn)在正常樣本中，hMLH1沒(méi)有或很少有甲基化，在腫瘤組織樣本中hMLH1存在比較高的甲基化(25％-58％)，而在手術(shù)切緣陰性組織中hMLH1存在中等程度的甲基化(8-42％)。這種甲基化升高的現(xiàn)象和腫瘤的發(fā)生和發(fā)展是一個(gè)逐步演進(jìn)的過(guò)程相一致。另外手術(shù)陰

4、性組織存在甲基化且存在著甲基化模式，這說(shuō)明細(xì)胞的先驅(qū)損害和殘留的腫瘤細(xì)胞存在于手術(shù)切緣陰性組織，而常規(guī)的病理學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)不了。本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明，通過(guò)敏感的高通量的甲基化分析技術(shù)，可以在手術(shù)切緣陰性組織中檢測(cè)出甲基化的模式，可以為腫瘤的診斷和預(yù)后分析提供參考與依據(jù)。 2．MGMT基因在結(jié)直腸癌手術(shù)切緣組織中表達(dá)與甲基化及其與預(yù)后的關(guān)系目前，分析腫瘤預(yù)后情況，主要集中在腫瘤原癌組織，很少有用手術(shù)切緣組織。運(yùn)用芯片技術(shù)，更是未有報(bào)道。