p63在大鼠角膜損傷修復(fù)過程中的表達(dá)和意義.pdf

1、目的：通過刮除部分角膜上皮造成角膜損傷，啟動大鼠的角膜修復(fù)機(jī)制，檢測p63基因在損傷修復(fù)過程中的表達(dá)量的變化，探討p63在大鼠角膜損傷修復(fù)過程中的意義。 方法：1.刮除大鼠部分角膜上皮，啟動大鼠的角膜修復(fù)機(jī)制，分別在損傷后不同的時(shí)間點(diǎn)(0h，6h，12h，24h，48h)處死大鼠：2.進(jìn)行熒光素鈉染色實(shí)驗(yàn)，裂隙燈下觀察角膜損傷和愈合情況；3.大鼠處死后，制作眼球石蠟切片，進(jìn)行免疫熒光反應(yīng)，觀察p63蛋白在大鼠角膜緣和角膜中央?yún)^(qū)的

2、表達(dá)情況，記錄并分析p63蛋白在不同時(shí)間組中的表達(dá)量；4.大鼠處死后，分別取其角膜緣及角膜中央組織，提取RNA，進(jìn)行RT-PCR反應(yīng)，記錄并分析p63基因在不同時(shí)間組中的表達(dá)量。 結(jié)果：1.免疫熒光反應(yīng)結(jié)果顯示，正常角膜緣有p63表達(dá)而角膜中央?yún)^(qū)無p63表達(dá)。在修復(fù)過程中，p63在各組角膜中央?yún)^(qū)均為陰性表達(dá)，和每組角膜緣相比，有根本區(qū)別。在角膜緣表達(dá)的量隨時(shí)間延長增多，并在24h達(dá)高峰，而后又減少。正常角膜和損傷后0h組的角膜緣

3、平均吸光度值之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。角膜損傷后各組角膜緣平均吸光度值之間，除6h組和48h組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義外，其它各組之間差別均有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。2.RT-PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，角膜損傷后，p63在各組角膜中央?yún)^(qū)表達(dá)均為0，和每組角膜緣相比，差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。角膜緣p63基因表達(dá)量隨時(shí)間延長逐漸增多，24h表達(dá)量最多，而后又減少.正常組和損傷后0h組的角膜緣p63表達(dá)量之間差別無統(tǒng)計(jì)