Matrilin-2和-4在人牙髓-牙本質(zhì)復(fù)合體損傷修復(fù)過(guò)程中的表達(dá).pdf

1、第一章、Matrilin-2和-4在正常和深齲人牙髓組織中的表達(dá)研究。
　　 目的：觀察matrilin-2和-4蛋白及mRNA在正常和深齲人牙髓組織中的表達(dá)分布，探討matrilin-2和-4與牙髓-牙本質(zhì)復(fù)合體損傷修復(fù)的關(guān)系。
　　 材料方法：分別收集因阻生或正畸治療需要拔除的人健康完整第三恒磨牙和因深齲拔除的第三恒磨牙(患者年齡25-29歲)，制作牙髓組織切片，采用免疫組織化學(xué)法觀察正常和深齲牙髓組織切片中matr

2、ilin-2和-4及DSP蛋白的表達(dá)分布；分別提取正常和深齲牙髓組織的總mRNA，采用熒光定量RT-PCR法檢測(cè)正常和深齲牙髓中matrilin-2和-4及DSPPmRNA的表達(dá)差異。
　　 結(jié)果：HE染色顯示正常牙髓被牙本質(zhì)包繞，其外層是具有牙本質(zhì)形成功能的成牙本質(zhì)細(xì)胞層；當(dāng)牙體發(fā)生深齲時(shí)，牙髓組織的HE染色可見(jiàn)齲損下方的成牙本質(zhì)細(xì)胞層增厚，其相鄰的H(o)hl細(xì)胞層增殖明顯，細(xì)胞分布密集，無(wú)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。免疫組織化學(xué)法觀察到

3、，正常牙髓組織中matrilin-2廣泛分布于牙髓及成牙本質(zhì)細(xì)胞層，而matrilin-4僅分布于成牙本質(zhì)細(xì)胞層；深齲牙髓組織中，在齲損下方的成牙本質(zhì)細(xì)胞層底層及相鄰牙髓組織中，matrilin-2表達(dá)較弱，而matrilin-4呈陽(yáng)性表達(dá)。熒光定量RT-PCR檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與正常牙髓組織相比，在深齲刺激的牙髓組織中，matrilin-2mRNA表達(dá)下調(diào)，而matrilin-4mRNA表達(dá)上調(diào)，同時(shí)matrilin-4的表達(dá)與DSP呈現(xiàn)

4、一致性。
　　 結(jié)論：正常牙髓組織中matrilin-2廣泛分布于牙髓及成牙本質(zhì)細(xì)胞層而matrilin-4僅分布于成牙本質(zhì)細(xì)胞層，深齲時(shí)牙髓組織中matrilin-2和-4蛋白和mRNA的表達(dá)較正常牙髓組織均有改變，因此推測(cè)matrilin-2和-4的表達(dá)與牙髓-牙本質(zhì)復(fù)合體損傷修復(fù)有關(guān)。
　　 第二章、Matrilin-2和-4在體外培養(yǎng)的HDPCs和成牙本質(zhì)樣細(xì)胞中的表達(dá)。
　　 目的：檢測(cè)matrilin

5、-2和-4在體外培養(yǎng)的HDPCs及成牙本質(zhì)樣細(xì)胞中的表達(dá)，驗(yàn)證體內(nèi)實(shí)驗(yàn)，為進(jìn)一步研究matrilin-2和-4的在牙髓-牙本質(zhì)復(fù)合體損傷修復(fù)過(guò)程中的表達(dá)奠定基礎(chǔ)。
　　 材料方法：酶消化法對(duì)HDPCs進(jìn)行分離培養(yǎng)。HDPCs體外培養(yǎng)至第三代，更換為礦化誘導(dǎo)液，連續(xù)培養(yǎng)21天。采用茜素紅染色法檢測(cè)HDPCs向成牙本質(zhì)樣細(xì)胞分化后形成的礦化結(jié)節(jié)。采用免疫熒光法檢測(cè)matrilin-2和-4及DSP蛋白在HDPCs及其分化的成牙本質(zhì)樣

6、細(xì)胞中的表達(dá)。
　　 結(jié)果：酶消化法獲得的HDPCs呈長(zhǎng)梭形克隆性生長(zhǎng)。礦化誘導(dǎo)21天后茜素紅染色可見(jiàn)礦化結(jié)節(jié)形成。免疫熒光法顯示：礦化誘導(dǎo)前，在HDPCs中matrilin-2呈陽(yáng)性表達(dá)，分布于胞漿，matrilin-4和DSP則呈陰性表達(dá)；礦化誘導(dǎo)21后，細(xì)胞中matrilin-2表達(dá)較弱，而matrilin-4和DSP表達(dá)呈陽(yáng)性，分布于胞漿。
　　 結(jié)論：獲得體外培養(yǎng)的HDPCs系，并誘導(dǎo)其向成牙本質(zhì)細(xì)胞分化。證實(shí)

7、matrilin-2和-4在體外培養(yǎng)的HDPCs和成牙本質(zhì)樣細(xì)胞中的表達(dá)分布與體內(nèi)實(shí)驗(yàn)一致。
　　 第三章、Matrilin-2和-4在HDPCs向成牙本質(zhì)細(xì)胞分化過(guò)程中的表達(dá)。
　　 目的：研究matrilin-2和-4蛋白及mRNA在HDPCs向成牙本質(zhì)細(xì)胞分化過(guò)程中不同時(shí)點(diǎn)的表達(dá)，探討matrilin-2和-4參與牙髓-牙本質(zhì)復(fù)合體損傷修復(fù)的機(jī)制。
　　 材料方法：將第三代HDPCs體外礦化誘導(dǎo)21天，分別

8、提取礦化誘導(dǎo)培養(yǎng)0、7、14、21天的細(xì)胞樣本總蛋白和mRNA，采用western-blot和實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR分別檢測(cè)matrilin-2和-4蛋白及mRNA在DPCs向成牙本質(zhì)細(xì)胞分化過(guò)程中不同時(shí)點(diǎn)的表達(dá)。
　　 結(jié)果：Matrilin-2蛋白在DPCs中的表達(dá)隨礦化誘導(dǎo)時(shí)間延長(zhǎng)呈下調(diào)趨勢(shì)，其mRNA的表達(dá)在礦化誘導(dǎo)的前兩周呈顯著下調(diào)趨勢(shì)，但第三周時(shí)其表達(dá)明顯增高。Matrilin-4蛋白和mRNA的表達(dá)均隨時(shí)間呈上調(diào)