胞壁酰二肽對(duì)兒童急性白血病骨髓樹突狀細(xì)胞影響的研究.pdf

1、第一部分：胞壁酰二肽對(duì)兒童急性白血病骨髓樹突狀細(xì)胞體外擴(kuò)增的影響
　　 目的探討胞壁酰二肽(MDP)對(duì)兒童急性向血病骨髓樹突狀細(xì)胞(DC)體外擴(kuò)增及成熟的影響。
　　 方法：采用Ficoll-Hypaque法分離急性白血病患兒骨髓單個(gè)核細(xì)胞，對(duì)照組以含10％FCS的RPMI1640培養(yǎng)液培養(yǎng)單個(gè)核細(xì)胞；實(shí)驗(yàn)組分為3個(gè)亞組：l組：MDP組；2組：細(xì)胞因子組；3組：細(xì)胞因子聯(lián)合MDP組，分別誘導(dǎo)單個(gè)核細(xì)胞。光學(xué)顯微鏡下觀察每

2、口細(xì)胞生長(zhǎng)情況及細(xì)胞形態(tài)，培養(yǎng)第8天，計(jì)數(shù)各組細(xì)胞數(shù)量，并應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組細(xì)胞免疫表型。
　　 結(jié)果：①培養(yǎng)第8天，對(duì)照組細(xì)胞數(shù)為(0.85±0.23)×105/L，實(shí)驗(yàn)l組、2組、3組細(xì)胞數(shù)分別為(2.31±0.24)×lOS/L、(3.26±0.37)×lOS/L及(4.16±0.34)X1OS/L，均明顯高于對(duì)照組（t分別為9.82、12.35、18.03，p均<0.01）；l組低于2組及3組（t分別為4.81、7.

3、26，p均<0.01）；3組明顯高于2組(t=4.00，p<0.01)。②細(xì)胞免疫表型顯示：對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)1組、2組及3組的HLA-DR+細(xì)胞比例分別為（19.98+3.74）％、(37.24+4.32)％、（58.81+2.08）％及（77.48+5.57）％，l組明顯高于對(duì)照組(t=6.75，p<0.01)，而低于2組、3組（t分別為10.06、12.76，p均<0.01）；3組明顯高于2組（t=7.02，p<0.01)。對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)

4、l組、2組及3組的CDIa+細(xì)胞比例分別為（11.46+2.43）％、(28.71士6.64)％、(46.92+4.78)％及（57.03-3.07）％，1組明顯高于對(duì)照組(t=5.46，p<0.01)，而低于2組、3組（t分別為4.98、8.66，p均<0.01）；3組明顯高于2組(t=3.98，p<0.01)。對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)l組、2組及3組的CD83+細(xì)胞比例分別為（13.05士5.70）％、（36.32士5.61）％、（54.9士5

5、7.83）％及（75.70士66.67）％，l組明顯高于對(duì)照組(t=6.51，p　　 結(jié)論：1．各組均得到一定數(shù)量的DCs，MDP組明顯低于細(xì)胞因了組，細(xì)胞因子聯(lián)合MDP組明顯高于MDP組和細(xì)胞因子組，提示MDP具有促進(jìn)急性白血病患兒骨髓DC增殖的作用，與細(xì)胞因子聯(lián)合作用更強(qiáng)。
　　 2．MD

6、P組CD83+，CDIa+及HLA-DR十表達(dá)明顯高于對(duì)照組，但低于細(xì)胞因子組，細(xì)胞因子聯(lián)合MDP組明顯高于MDP組和細(xì)胞因子組，提示MDP具有促進(jìn)急性白血病患兒骨髓DC成熟的作用，與細(xì)胞因子聯(lián)合作用更強(qiáng)。
　　
　　 第二部分：胞壁酰二肽對(duì)兒童急性白血病骨髓樹突狀細(xì)胞功能的影響
　　 目的探討胞壁酰二肽(MDP)對(duì)兒童急性臼血病骨髓樹突狀細(xì)胞(DC)功能的影響。
　　 方法：應(yīng)用Ficoll-Hypa

7、que法分離急性白血病忠兒骨髓單個(gè)核細(xì)胞，對(duì)照組用細(xì)胞因子誘導(dǎo)培養(yǎng)DC;實(shí)驗(yàn)組分為5個(gè)亞組：1組：MDP組(102ug/l):2組：細(xì)胞因子聯(lián)合MDP（10ug/I）組；3組：細(xì)胞因子聯(lián)合MDP（102ug/I）組；4組：細(xì)胞因子聯(lián)合MDP(103ug/l)組；5組：細(xì)胞網(wǎng)子聯(lián)合MDP(104ug/l)組，分別誘導(dǎo)培養(yǎng)DC，培養(yǎng)第9天收獲各組DC，將DC與兒童急性淋巴細(xì)胞性白血病同種異體骨髓T淋巴細(xì)胞混合反應(yīng)96h，觀察淋巴細(xì)胞的增殖情

8、況，ELISA方法檢測(cè)上清液中IL-12、IFN-丫含量；經(jīng)HL-60抗原致敏后的DC與培養(yǎng)第7天的骨髓T淋巴細(xì)胞及HL-60細(xì)胞共I一孵育72h，MTT法檢測(cè)各組細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞的殺傷活性。
　　 結(jié)果：1．混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)顯示：①T細(xì)胞擴(kuò)增指數(shù)：當(dāng)刺激細(xì)胞數(shù)為l×103時(shí)，對(duì)照組與l組、2組比較均無(wú)顯著性差異(p>0.05)；3組、4組、5組均明顯高于對(duì)照組（t分別為7.37、10.10、13.53，p均<0.01），亦明顯

9、高于l組（t分別為8.49、10.24、13.39，p均<0.01）。當(dāng)刺激細(xì)胞數(shù)為1×103至l×104，各組T細(xì)胞的擴(kuò)增指數(shù)均增加，3組、4組、5組明顯高于對(duì)照組及l(fā)組（p均<0.01），2組與對(duì)照組、l組比較無(wú)顯著性差異(p>0.05)。②T細(xì)胞分泌細(xì)胞因子：當(dāng)刺激細(xì)胞數(shù)為5x104時(shí)，對(duì)照組與l組、2組IL-12含量的比較均無(wú)顯著性差異；3組、4組、5組明顯高于對(duì)照組（t分別為8.31、10.63、12.16，p均<0.01），

10、亦明顯高于l組（t分別為8.25、10.61、11.90，p均<0.01）。對(duì)照組與l組、2組IFN-γ含量的比較均無(wú)顯著性差異；3組、4組、5組明顯高于對(duì)照組（t分別為9.21、12.62、15.38，p均<0.01），亦明顯高于1組（t分別為9.59、12.77、15.66，p均<0.01）。2．殺瘤活性結(jié)果顯示：實(shí)驗(yàn)各組殺傷HL-60細(xì)胞活性均較對(duì)照組顯著增強(qiáng)（f分別為5.24、10.97、15.98、18.19、22.69，p均

11、<0.01）；當(dāng)MDP濃度由102ug/l遞增至104ug/l，2組、3組、4組、5組組間比較，殺傷活性逐漸增加(t23=3.79、t24=7.34、t25=10.32、t34=3.75、t35=7.38、t45=3.50，p均<0.01)，以5組殺傷HL-60細(xì)胞活性最強(qiáng)。
　　 結(jié)論：1．經(jīng)MDP誘導(dǎo)后的DC，在lxl03即能刺激I司種異體淋巴細(xì)胞增殖，當(dāng)刺激細(xì)胞數(shù)為I×103至l×l04，淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)增強(qiáng)；MDP組與細(xì)

12、胞網(wǎng)子組比較無(wú)明顯差異；當(dāng)MDP≥102ug/I時(shí)，與細(xì)胞因子聯(lián)合效果明顯。提示當(dāng)MDP誘導(dǎo)后的DC數(shù)量≥lxl03時(shí)，即能促進(jìn)T細(xì)胞的增殖，且有MDP濃度依賴性。
　　 2．經(jīng)MDP誘導(dǎo)后的DC可促進(jìn)T細(xì)胞分泌IL-12及IFN-γ，與細(xì)胞因子組比較無(wú)明顯差異；當(dāng)MDP≥102ug/I時(shí)，與細(xì)胞因子聯(lián)合效果明顯。提示經(jīng)MDP誘導(dǎo)后的DC具有促進(jìn)T細(xì)胞分泌的作用，與細(xì)胞因子聯(lián)合作用更強(qiáng)。
　　 3．實(shí)驗(yàn)各組均有明顯的殺瘤