慢性粒細(xì)胞白血病總RNA轉(zhuǎn)染樹突狀細(xì)胞介導(dǎo)的抗慢性粒細(xì)胞白血病作用的體外研究.pdf

1、目的：探討人慢性粒細(xì)胞白血病(CML)總RNA體外轉(zhuǎn)染自體慢性粒細(xì)胞白血病-樹突狀細(xì)胞(CML-DC)，并誘導(dǎo)特異性細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞(CTL)免疫反應(yīng)，為CML疫苗的臨床研究提供理論依據(jù)。 方法：利用10例CML患者骨髓單個核細(xì)胞(BMMNC),加入重組白介素-4(rhIL-4)、重組粒單細(xì)胞集落刺激因子(rhGM-CSF)、重組腫瘤壞死因子(rhTNF-α)等細(xì)胞因子聯(lián)合培養(yǎng)誘導(dǎo)CML-DC。用Trizol法提取CML-BMM

2、NC的總RNA，用CML-BMMNC制備腫瘤凍融抗原。于CML-DC培養(yǎng)第5天，將CML-DC分成4組，比較總RNA經(jīng)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的CML-DC，總RNA不經(jīng)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的CML-DC，CML腫瘤凍融抗原負(fù)載的CML-DC，未負(fù)載抗原的CML-DC共4組分別致敏T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的CTL殺傷活性，另設(shè)以IL-2培養(yǎng)的T淋巴細(xì)胞為空白對照組。用四甲基偶氮唑鹽比色法(MTF法)檢測不同方法產(chǎn)生的CTL殺傷CML細(xì)胞的作用；用倒置顯微鏡觀察CML-D

3、C誘導(dǎo)前后形態(tài)學(xué)變化；用流式細(xì)胞儀器檢測CML-DC誘導(dǎo)前后CD1 α、CD83表型變化；用染色體G顯帶技術(shù)及逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測其染色體核型及Bcr-ab1融合基因的表達。 結(jié)果：CML BMMNC誘導(dǎo)成CML-DC，CD1 α、CD83表型誘導(dǎo)前均在5％以下，誘導(dǎo)培養(yǎng)成熟的CML-DC細(xì)胞CD1a、CD83陽性細(xì)胞分別占(20.15±3.36)％、(25.37±2.72)％較前均明顯增高。誘導(dǎo)的CML-DC

4、均存在Bcr-ab1基因帶和Ph1染色體，提示CML-DC為白血病源性?？俁NA經(jīng)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染CML-DC、總RNA不經(jīng)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染CML-DC、CML腫瘤凍融抗原負(fù)載CML-DC、未負(fù)載抗原CML-DC分別致敏的CTL及IL-2培養(yǎng)的T淋巴細(xì)胞在效：靶比為20.1時的殺傷效率分別為74.67±3.54％、36.45±3.02％、51.07±3.67％、31.52±1.82％、10.62±3.17％?？俁NA經(jīng)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的DC所誘導(dǎo)的CTL