鹽酸多柔比星誘導犬乳腺腫瘤CHMp、CHMm細胞凋亡.pdf

1、犬乳腺腫瘤是僅次于皮膚腫瘤的常見腫瘤，迄今外科手術聯(lián)合化學藥物是最有效的治療方法。基于獸醫(yī)臨床尚無理想的化療藥物、復制人醫(yī)臨床的化療藥物應用于治療犬乳腺腫瘤缺乏理論及依據(jù)、研發(fā)新藥時程長且成功率低等現(xiàn)狀，本研究選用在治療人耐藥性乳腺腫瘤中取得良好效果的鹽酸多柔比星進行體外抗腫瘤實驗。研究該藥誘導犬乳腺腫瘤細胞的凋亡機制，目的在于探求其在抗犬乳腺腫瘤的作用靶點及機理，為該藥的化學療法在應用于寵物臨床提供理論依據(jù)，以解決寵物臨床化療藥物匱乏

2、的燃眉之急。
　　選用鹽酸多柔比星作為誘導劑及體外培養(yǎng)的犬乳腺腫瘤原發(fā)病灶及其轉移灶的細胞系CHMp株和CHMm株為研究對象，利用CCK-8法分析鹽酸多柔比星對兩株乳腺腫瘤細胞系的抑制情況，選用不同的藥物濃度誘導腫瘤細胞，進行形態(tài)學觀察。同時利用AO/EB染色法考證藥物對兩株細胞系的促凋亡作用，并通過分光光度法檢測處理后胞內(nèi)凋亡相關蛋白Caspase-3、6、8、9的活性變化，Real-time PCR法檢測細胞中Bcl-2 mR

3、NA、Bax mRNA、p53 mRNA等相關凋亡因子表達量變化，Western Blotting方法檢測胞漿蛋白中促凋亡蛋白Bax的表達情況，從而初步探究鹽酸多柔比星誘導犬乳腺腫瘤細胞的機制。
　　實驗結果顯示，不同濃度的鹽酸多柔比星均能有效的誘導犬乳腺腫瘤細胞凋亡，藥物濃度越高，抑制能力越強，且能顯著提高CHMp胞內(nèi)Caspase-3、6、8、9的表達量（P≤0.05）；極顯著提高CHMm胞內(nèi)Caspase-3的表達量（P≤0

4、.001），顯著提高Caspase-6、8、9的表達量（P≤0.05）。與此同時，不同的藥物濃度均使CHMp細胞內(nèi)p53 mRNA、Bax mRNA表達量極顯著提高（P≤0.001），Bcl-2 mRNA表達無明顯差異；使CHMm細胞內(nèi)p53 mRNA表達顯著提高（P≤0.05），Bax mRNA表達量極顯著提高（P≤0.001），Bcl-2 mRNA表達無明顯差異或呈極顯著降低（P≤0.001）。Western Blotting結果顯

5、示，藥物作用誘導細胞以后，兩種細胞胞內(nèi)促凋亡蛋白Bax表達量提高，且表達量與藥物濃度呈正相關。該實驗結果表明鹽酸多柔比星可通過促進細胞周期調(diào)控相關因子p53、線粒體凋亡通路相關因子Bcl-2家族成員Bax、死亡受體通路相關成員Caspase家族，激活Caspase聯(lián)級反應啟動細胞凋亡程序，從而誘導細胞發(fā)生凋亡。
　　本實驗初步揭示了鹽酸多柔比星誘導犬乳腺腫瘤細胞凋亡的相關機制，為獸醫(yī)臨床應用該藥物奠定科學理論基礎，為篩選有效寵物臨